導讀:如果在基質皮質醇ELISA試劑盒實驗時發現顯色淡要怎么辦？問題出在哪里？今天的技術文章將主要針對Elisa顯色淡的原因及解決方案做一系列分析。下面一起來看看今天的分析內容吧！
基質皮質醇ELISA試劑盒顯色淡的主要原因有哪些：
1.原因：試劑盒在運輸途中時間太長，溫度太高。
解決方案：盡量縮短運輸時間，夏季應放冰塊降溫。
2.原因：試劑盒未充分平衡。
解決方案：試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫(約25℃)。
3.原因：培養箱溫度不足37℃。
解決方案：注意培養箱溫度，放入反應板后盡量減少開啟次數以免影響溫度恒定，非隔水式培養箱尤其應注意。
4.原因：保溫時間不足。
解決方案：校正定時鐘準確定時。
5.原因：洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數增加。
解決方案：按說明書要求保留洗滌時間，準確記住洗滌次數。
6.原因：移液器吸液量不足，吸嘴內壁掛水太多或內壁不清潔。
解決方案：校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時要緊密，吸嘴內壁要清潔，一次性使用。
7.原因：蒸餾水水質有問題。
解決方案：使用新鮮合格的蒸餾。
8.原因：底物作用時間不足。
解決方案：準確定時。
注意：顯色一定要控制時間，根據試劑盒說明操作即可。一般來說，顯色時間過短，結果偏低；顯色時間過長，空白增高或者非特異性顯色增加。
基質皮質醇ELISA試劑盒參考標準
、標準曲線
1.定量方法：標準曲線至少由5個濃度組成，測定次數不少于5次，以確定工作濃度范圍和IC50范圍。
2.定性方法：工作濃度范圍通過陰性、臨界值濃度和陽性的樣品測定來確定，每個濃度重復不少于5次，濃度與響應值之間應有一定的關系。
第二、檢測限和定量限
1.檢測限：20份空白樣品測定均值加3倍標準差。
2.定量限：應大于標準曲線中低濃度點。對于定量方法，應對該濃度樣品至少測定6次進行驗證，而不能通過外延法推斷。
第三、臨界值（cut-off值）的確定
對于有高殘留限量的藥物，檢測方法的臨界值為20份添加MRL濃度的樣品重復3次測定的均值減去1.64倍標準差，即95%置信限處。
對于禁用藥物，檢測方法的臨界值為定量限，該值應達到公認的指標。
第四、度和準確度
對于有高殘留限量的藥物，添加濃度為MRL及MRL上下各一個濃度；對于禁用藥物，添加濃度為定量限和2倍定量限，每個添加濃度至少測定5個平行樣，并至少進行3批實驗（不同檢測日期，不同標準曲線，不同批次試劑盒）。
1.準確度：回收率范圍大于40%或符合相應檢測標準的要求。
2.度：以變異系數表示。
批內變異系數：每批平行樣之間的變異系數小于或等于25%，對于禁用藥物小于或等于30%.
批間變異系數：所有樣品之間的變異系數值小于或等于30%，對于禁用藥物小于或等于40%.
定性方法：陰性和陽性樣品各測定不少于50份，確定假陽性率和假陰性率。
第五、交叉反應
試劑盒與待檢藥物類似物、代謝物或共同存在的藥物測定交叉反應率。
第六、保存期
保存期通過保存條件的穩定性試驗結果確定。
第七、復核試驗
1.定量方法：檢測限、IC50以及至少兩個添加濃度的準確度和度，并與理化方法（或與具代表性進口試劑盒）比較。
2.定性方法：檢測限、假陽性率和假陰性率。