怎樣學(xué)會(huì)分離成纖維細(xì)胞？樊克新方法哦!
成纖維細(xì)胞（又稱皮膚成纖維細(xì)胞）屬于由中胚層分化而來(lái)的間質(zhì)細(xì)胞。細(xì)胞來(lái)源于人正常的皮膚組織，成纖維細(xì)胞是一種貼壁培養(yǎng)方式的細(xì)胞，由于這些細(xì)胞非常容易培養(yǎng)，它們已經(jīng)被廣泛用于細(xì)胞和分子生物學(xué)研究中。
一般而言，成纖維細(xì)胞能夠分泌I型和 III 型膠原等細(xì)胞外基質(zhì)，并且研究表明不同器官中的成纖維細(xì)胞有顯著的不同。
傷口修復(fù)時(shí)，成纖維細(xì)胞由可增殖，可遷移的表型變?yōu)橛惺湛s性的，可重塑基質(zhì)的表型，同時(shí)，它們會(huì)分泌大量的透明質(zhì)酸來(lái)應(yīng)對(duì)修復(fù)時(shí)的炎癥反應(yīng)。
以下是樊克生物提供的一種人成纖維細(xì)胞的制備方式（僅供參考）：
一般而言，成纖維細(xì)胞能夠分泌I型和 III 型膠原等細(xì)胞外基質(zhì)，并且研究表明不同器官中的成纖維細(xì)胞有顯著的不同。
傷口修復(fù)時(shí)，成纖維細(xì)胞由可增殖，可遷移的表型變?yōu)橛惺湛s性的，可重塑基質(zhì)的表型，同時(shí)，它們會(huì)分泌大量的透明質(zhì)酸來(lái)應(yīng)對(duì)修復(fù)時(shí)的炎癥反應(yīng)。
- 先在分離成纖維細(xì)胞時(shí)要做到在無(wú)菌條件下進(jìn)行，打開生物安全柜紫外燈 30min 作無(wú)菌處理。
- 將手術(shù)廢棄的皮膚組織浸泡 75% 酒精，消毒 2min，
- 將皮膚組織置含 P/S 的 PBS 中清洗至少 3 遍，
- 然后用眼科剪除去脂肪及結(jié)締組織等，
- 將皮膚剪成 0.5*0.5 cm 小塊，放入 dish 中，加 0.1% 的 dispase 溶液，封口膜封口，4℃ 冰箱過(guò)夜消化，
- 第二天，用鑷子將表皮與分開（薄的那層是表皮，厚的那層是），
- 將剪碎，移至離心管，用 0.1% 膠原 Ⅰ 型酶+0.1% 膠原Ⅱ型酶+0.1% 膠原Ⅳ型酶+ 37℃ 水浴鍋中消化至少 2 h（視消化程度而定），
- 用 100 μm 網(wǎng)篩過(guò)濾，
- 取濾液，300 g，離心5 min，
- 用完全培養(yǎng)基重懸沉淀，
- 鋪瓶，
- 隔天換液。
