解析為何純化蛋白與人血清蛋白分子量不一樣
蛋白質(zhì)作為生命活動中起重要作用的生物大分子，與一切揭開生命奧秘的重大研究課題都有密切的關(guān)系。蛋白質(zhì)是人類和其他動物的主要食物成分，高蛋白膳食是人民生活水平提高的重要標(biāo)志之一。以下針對純化蛋白與人血清蛋白分子量不一樣作分析：
客戶問：
用大腸桿菌表達純化的蛋白，和人血清中這種蛋白的分子量不同，western顯示血清中這種蛋白的分子量高于純化的蛋白，請問如何解釋呢？
技術(shù)答：
1 可能人血清中的蛋白是被修飾了的，如糖基化以及其他可以影響分子量的修飾。不知道血清中的分子量比你純化的大多少KD？
2 檢查一下蛋白序列中有沒有糖基化位點。大腸桿菌不能糖基化。
3 不知道如何確定是否用糖基化位點呢？血清中分子量比純化的高個2~3kd吧，這是糖基化么？
4 N即Asparagine Asp
X即任意氨基酸
T即Threo
S即Serine Ser
NXT NXS即在氨基酸一級結(jié)構(gòu)中有Asp-X-Thr或Asp-X-Ser序列則會被糖基化。
查文獻我建議可查其蛋白質(zhì)性質(zhì)研究方面的文獻，或以蛋白+糖基化作關(guān)鍵詞嘗試查詢。你關(guān)注生物活性時可不能忽略糖基化這一點哦，往往糖基化是很多蛋白折疊和實現(xiàn)活性的重要因素。
5 糖基化分三種，N糖基化有特殊識別序列N-X-S/T，O糖基化發(fā)生位點迄今尚無明確規(guī)律，糖基磷脂酰肌醇錨定一般是定位在細胞膜上，可能血清中的蛋白是沒有的。由于糖基化不是由模板合成，表現(xiàn)出微觀不均一性，因此其分子量是有一定變化。
一般可預(yù)測N糖基化位點，如果存在N-X-S或N-X-T序列，則基本上都是要被糖基化的。zui好能查找一下相關(guān)文獻，如果你做的蛋白是已知的，一般都會有文獻報道糖基化分三種，N糖基化有特殊識別序列N-X-S/T，O糖基化發(fā)生位點迄今尚無明確規(guī)律，糖基磷脂酰肌醇錨定一般是定位在細胞膜上，可能血清中的蛋白是沒有的。由于糖基化不是由模板合成，表現(xiàn)出微觀不均一性，因此其分子量是有一定變化。
一般可預(yù)測N糖基化位點，如果存在N-X-S或N-X-T序列，則基本上都是要被糖基化的。zui好能查找一下相關(guān)文獻，如果你做的蛋白是已知的，一般都會有文獻報道。。
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