細(xì)胞收到后，很多同學(xué)都會(huì)措手不及，這么個(gè)脆弱的東東，該怎么辦，以下是我們整理的一些經(jīng)驗(yàn)分享給大家。


1. 收到細(xì)胞株包裹時(shí)，請(qǐng)檢查細(xì)胞株冷凍管是否有解凍情形，若有請(qǐng)立即通知。細(xì)胞株請(qǐng)盡速開(kāi)始培養(yǎng)， 或立即冷凍保存(置于–70 °C，隔夜后，移到liq N2)。

2. 冷凍細(xì)胞解凍程序:

一、根據(jù)細(xì)胞說(shuō)明書來(lái)配置培養(yǎng)基，不同的細(xì)胞株適應(yīng)的培養(yǎng)基不同，請(qǐng)務(wù)必按細(xì)胞需求來(lái)配置。

大多數(shù)的細(xì)胞均無(wú)法立即適應(yīng)不同的基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同的血清種類，所以當(dāng)細(xì)胞換成你們自己的培養(yǎng)基生長(zhǎng)狀態(tài)變差或者速度變緩的時(shí)候，不要著急，可以靜養(yǎng)一段時(shí)間。給細(xì)胞一個(gè)適應(yīng)的時(shí)間，不要一日看三回，操之過(guò)急；如實(shí)驗(yàn)確實(shí)緊張，可以使用中喬新舟細(xì)胞株完全培養(yǎng)基，此培養(yǎng)基是按細(xì)胞精心優(yōu)化，種類豐富，適合中喬新舟任意一株細(xì)胞的培養(yǎng)。若因?qū)嶒?yàn)需要，必須有所不同時(shí)， 請(qǐng)務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成，確定細(xì)胞生長(zhǎng)適應(yīng)后，方進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

二、FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 馬血清)，對(duì)細(xì)胞而言差異大，請(qǐng)務(wù)必依據(jù)細(xì)胞說(shuō)明書選擇相應(yīng)的血清 ，這點(diǎn)很重要。

細(xì)胞復(fù)蘇的方法：

三 、將培養(yǎng)基置于37 °C 水槽中回溫， 回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之， 移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。

取出冷凍管， 立即放入37 °C 水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過(guò)冷凍管之蓋沿， 否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化后，以70%ethanol擦拭冷凍管外部，移入無(wú)菌操作臺(tái)

2.4. 依據(jù)細(xì)胞種類和濃度，于無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)取10 ml 培養(yǎng)基加至T25 或T75 flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液，

緩緩加入T25 或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基，混合均勻，放入37 °C，5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

2.5. 對(duì)大多數(shù)細(xì)胞而言，1 % 以下的冷凍保護(hù)劑DMSO，不會(huì)對(duì)細(xì)胞之貼附或活化有不良影響，不需立刻由解凍的 細(xì)胞中去除，待第二天確定細(xì)胞生長(zhǎng)或貼附良好后再去除即可。

對(duì)少數(shù)因?qū)MSO 敏感或會(huì)造成細(xì)胞分化之細(xì)胞，需立即去除DMSO ， 去除DMSO的方法如下：可將解凍后之細(xì)胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養(yǎng)基中，離心300 xg (約1000 rpm)，5 分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮培養(yǎng)基，將細(xì)胞均勻混合后，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，再放入37 °C， 5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

活細(xì)胞的處理方式︰

1. 細(xì)胞在寄送過(guò)程中，為避免起泡造成細(xì)胞脫落死亡，T25 flask 均加滿培養(yǎng)基。收到后，請(qǐng)檢查flask 外觀，并于顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)和有無(wú)污染現(xiàn)象，若有任何問(wèn)題，不要打開(kāi)蓋子，請(qǐng)立即通知我們。

2. 將原封的T25 flask細(xì)胞 靜置于細(xì)胞 培養(yǎng)箱中，讓細(xì)胞穩(wěn)定一下，并讓運(yùn)送過(guò)程中少數(shù)脫落的細(xì)胞可再附著生長(zhǎng)。2-4小時(shí)后，無(wú)菌操作箱內(nèi)取出flask內(nèi)之培養(yǎng)基，僅留約5-10ml 培養(yǎng)基于flask 內(nèi)，如無(wú)需傳代，請(qǐng)置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，如細(xì)胞已達(dá)到85%以上的密度，請(qǐng)立即將細(xì)胞做傳代處理。