PC12細胞培養(yǎng)實驗步驟
PC12細胞是大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻瘤分化細胞株，具神經(jīng)內(nèi)分泌細胞的一般特征，因其具可傳代特點，廣泛應(yīng)用于神經(jīng)生理和神經(jīng)藥理學研究。
1. PC12細胞有兩種：未分化型和分化型。其中未分化型的PC12細胞貼壁能力強，傳代時需要胰酶消化，形狀不規(guī)則。分化型PC12細胞傳代時不需要胰酶，直接可以吹下來，形狀規(guī)則。這兩種細胞沒有很大的區(qū)別，但我在實驗中發(fā)現(xiàn)，未分化型的PC12細胞對藥物的敏感性較之分化型的要差一些。
2. 由于PC12細胞是一種腫瘤細胞，在傳代次數(shù)較多后，它的形狀和性狀會發(fā)生改變。這些改變尤見于未分化型PC12細胞。主要是細胞形狀變得geng加不規(guī)則，對藥物的敏感性愈加下降。因此，建議長期用PC12細胞作實驗的戰(zhàn)友zui好嚴格控制細胞的傳代次數(shù)。
3.在復蘇細胞時動作一定要迅速，放入溫水中1～2min后要馬上加入培養(yǎng)液中，培養(yǎng)12～24小時后geng換一次培養(yǎng)液，這樣不僅可以把DMSO吸掉，而且可以將死亡的細胞也吸掉。細胞一天一看即可，經(jīng)常動會有影響。注意過濾后血清的PH值，因為培養(yǎng)液過濾后PH值會有所改變。復蘇后的換液時間取決于您復蘇時是否洗滌離心細胞，去除了凍存液中的DMSO，如果沒有去除DMSO，細胞培養(yǎng)過夜后就要徹底換液；如果復蘇時洗滌離心過，可以待傳代時再換液也可。（據(jù)我個人經(jīng)驗，還是復蘇時去除DMSO，細胞的生長狀態(tài)好一些）
4. 狀態(tài)良好的細胞復蘇后 4 h即可貼壁，開始增殖，大約2 d即可傳代，接種48h應(yīng)該到了對數(shù)增長期。
5. 每天觀察一兩次細胞我不認為會對細胞的生長造成不良影響，不過每次觀察的時間不易過長。
6. 傳代時我認為zui好不要用胰蛋白酶，因為胰蛋白酶對細胞有破壞作用。我以前用胰蛋白酶消化傳代過PC12, 結(jié)果傳代后的細胞雖然貼壁，形態(tài)也好，但就是增殖緩慢，所以我現(xiàn)在都是用槍吸取培養(yǎng)液直接吹打，傳代后細胞增殖迅速，2 d就長滿了（因為長的太快，我只好降低血清濃度，用5%FBS）
7. 傳代的時機zui好選在細胞生長旺盛，占瓶底70%－80%時zui好，如果細胞長的太滿，細胞的狀態(tài)會越來越差，zui后大片死亡；這種細胞傳代后生長也不好；而且長的太滿后，細胞貼壁牢，難于吹起來，相反，70%－80%時細胞很容易吹起來。
8. 如果細胞貼壁太緊，不得不用胰蛋白酶消化，注意低濃度，段時間，多洗滌。我一般用0.025％的胰蛋白酶，在鏡下觀察細胞突起收縮，有零星的細胞漂起就中止，或用肉眼觀察，瓶底呈現(xiàn)薄霧狀的模糊感時就中止，中止一定要徹底，要用含血清的培養(yǎng)液多洗滌離心幾次，確保去除剩余的胰蛋白酶，否則傳代后的細胞難以生長。
9. 就培養(yǎng)器皿的選用，我推薦在60mm的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)傳代，第1，在皿里細胞生長的geng快，我想可能是皿比瓶的氣體交換geng好吧；第二，傳代時吹打geng方便，不易污染。
1. PC12細胞有兩種：未分化型和分化型。其中未分化型的PC12細胞貼壁能力強，傳代時需要胰酶消化，形狀不規(guī)則。分化型PC12細胞傳代時不需要胰酶，直接可以吹下來，形狀規(guī)則。這兩種細胞沒有很大的區(qū)別，但我在實驗中發(fā)現(xiàn)，未分化型的PC12細胞對藥物的敏感性較之分化型的要差一些。
2. 由于PC12細胞是一種腫瘤細胞，在傳代次數(shù)較多后，它的形狀和性狀會發(fā)生改變。這些改變尤見于未分化型PC12細胞。主要是細胞形狀變得geng加不規(guī)則，對藥物的敏感性愈加下降。因此，建議長期用PC12細胞作實驗的戰(zhàn)友zui好嚴格控制細胞的傳代次數(shù)。
3.在復蘇細胞時動作一定要迅速，放入溫水中1～2min后要馬上加入培養(yǎng)液中，培養(yǎng)12～24小時后geng換一次培養(yǎng)液，這樣不僅可以把DMSO吸掉，而且可以將死亡的細胞也吸掉。細胞一天一看即可，經(jīng)常動會有影響。注意過濾后血清的PH值，因為培養(yǎng)液過濾后PH值會有所改變。復蘇后的換液時間取決于您復蘇時是否洗滌離心細胞，去除了凍存液中的DMSO，如果沒有去除DMSO，細胞培養(yǎng)過夜后就要徹底換液；如果復蘇時洗滌離心過，可以待傳代時再換液也可。（據(jù)我個人經(jīng)驗，還是復蘇時去除DMSO，細胞的生長狀態(tài)好一些）
4. 狀態(tài)良好的細胞復蘇后 4 h即可貼壁，開始增殖，大約2 d即可傳代，接種48h應(yīng)該到了對數(shù)增長期。
5. 每天觀察一兩次細胞我不認為會對細胞的生長造成不良影響，不過每次觀察的時間不易過長。
6. 傳代時我認為zui好不要用胰蛋白酶，因為胰蛋白酶對細胞有破壞作用。我以前用胰蛋白酶消化傳代過PC12, 結(jié)果傳代后的細胞雖然貼壁，形態(tài)也好，但就是增殖緩慢，所以我現(xiàn)在都是用槍吸取培養(yǎng)液直接吹打，傳代后細胞增殖迅速，2 d就長滿了（因為長的太快，我只好降低血清濃度，用5%FBS）
7. 傳代的時機zui好選在細胞生長旺盛，占瓶底70%－80%時zui好，如果細胞長的太滿，細胞的狀態(tài)會越來越差，zui后大片死亡；這種細胞傳代后生長也不好；而且長的太滿后，細胞貼壁牢，難于吹起來，相反，70%－80%時細胞很容易吹起來。
8. 如果細胞貼壁太緊，不得不用胰蛋白酶消化，注意低濃度，段時間，多洗滌。我一般用0.025％的胰蛋白酶，在鏡下觀察細胞突起收縮，有零星的細胞漂起就中止，或用肉眼觀察，瓶底呈現(xiàn)薄霧狀的模糊感時就中止，中止一定要徹底，要用含血清的培養(yǎng)液多洗滌離心幾次，確保去除剩余的胰蛋白酶，否則傳代后的細胞難以生長。
9. 就培養(yǎng)器皿的選用，我推薦在60mm的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)傳代，第1，在皿里細胞生長的geng快，我想可能是皿比瓶的氣體交換geng好吧；第二，傳代時吹打geng方便，不易污染。
