原理：在受體細胞經過化學試劑或者電擊處理等方法處理后，受體細胞的膜通透性發生改變，質粒DNA或者以其為載體的重組DNA分子，進入到細菌體內而實現擴增。

感受態細胞：是指細胞自然或者經過誘導處于容易吸收外源DNA的一種生理狀態。在基因工程中，用于轉化的受體菌（Restriction-Modification 缺陷變異株，以防止對導入外源DNA進行切割）一般通過誘導的方式實現。主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大，直觀的說，使得細胞膜表面出現一些孔洞，便于外源基因或載體進入感受態細胞。由于細胞膜的流動性，這種孔洞會被細胞自身所修復。

質粒的轉化主要包含

Ⅰ感受態細胞制備

Ⅱ質粒DNA轉化

Ⅲ質粒DNA的提取

（Ⅰ）感受態細胞制備

1）從新活化的大腸桿菌（常用DH5a）平板上挑取一個單菌落，接種于3ml LB培養基的試管中，37℃振蕩培養過夜。

2）將該菌懸液按照1:100轉接到液體培養基中，100ml，37℃振蕩擴大培養，2~3h。當培養液開始渾濁時，間段性測試OD600，在數值為0.3-0.5時停止培養。

3）培養好的菌液轉移到離心管中，冰上放置20min，0℃-4℃離心10min（4000r/min）。

4）棄掉上清，管口倒置以便培養液棄除干凈。

5）加入0.1mol/L冰冷的氯化鈣溶液30ml，小心懸浮沉淀細胞，冰浴30min。（氯化鈣的濃度和純度非常重要，不同批次不同廠家的產品均可影響感受態轉化率）

6）4℃離心10min（4000r/min）。

7）棄掉上清，用0.1mol/L氯化鈣2ml冰浴懸浮細胞（冰上放置）片刻，感受態細胞制成。

8）可直接用于實驗，4℃保存。也可分裝長期保存，加入總體積15%的滅菌甘油，-70℃條件下保存。

（Ⅱ）質粒DNA的轉化

1）取100ul新鮮制備的感受態細胞，加入質粒1ul DNA混勻,同時設置對照組（未加質粒，未加受體菌，已知具有轉化活性的DNA）。

冷凍的感受態細胞要在冰上解凍，待管中zui后一點冰融化后，迅即加入DNA. 解凍感受態細胞溫度高于0℃，會降低轉化效率。

2）冰浴30min，離心管放到42℃保溫90s（不要搖動離心管）。冰浴時間短于30min ,可能影響轉化率。然后迅速冰浴2min。

3）向離心管加800ulLB液體培養基，37℃振蕩培養1h（150r/min）。37℃生長1小時能夠對于細胞恢復和抗生素抗藥性表達具有zui佳效果。

4）取適當（50ul）的復蘇細胞培養液，涂布在含抗性的選擇性培養基上，將培養皿放置在37℃恒溫培養箱中，正置30min。等菌液完全被培養基吸收后，倒置培養皿，在37℃恒溫培養箱中，培養12~16h，出現菌落。

5）菌落結果：

① 無菌落

失敗或者培養條件不充分

② 布滿菌落,

呈苔樣，失敗。可能是抗生素濃度不夠或失敗。出現大菌斑，大多是由于霉菌污染所致

③ 布滿菌落

濃度太高，失敗

④ 出現菌落

符合要求

Ⅲ）質粒DNA的提取

質粒DNA的提取，由于其本身分子量小，一般采用堿裂解法提取。目前已研發出多種質粒提取試劑盒，實驗操作簡單，只需按照產品操作說明操作即可。不過對于其中主要試劑和作用的理解，能夠避免實驗過程中的一些問題，或者能夠geng好的解決問