一、自噬體介紹
自噬（Autophagy），或稱自體吞噬，是一個涉及到細胞自身結構通過溶酶體機制而被分解的過程，該過程是一個受到緊密調控的步驟，幫助細胞產物在合成、降解以及接下來的循環中保持一個平衡狀態。細胞接受自噬誘導信號后，在胞漿的某處形成一個扁平的類似“脂質體”樣的膜結構，稱為Phagophore。隨著Phagophore不斷延伸，將胞漿中的細胞器等成分，全部包裹住成為密閉的結構，稱為“自噬體（autophagosome）”。自噬體形成后，可與溶酶體融合，自噬體中的內容物隨即被降解，產物（氨基酸、脂肪酸等）被輸送到胞漿中，供細胞重新利用，而殘渣或被排出細胞外或滯留在胞漿中。自噬信號通路：


二、自噬研究策略和方法
正常細胞基礎水平自噬活性比較低，對自噬研究通常需要進行人工調節和干預，常用藥物有：
1、自噬誘導劑
a) Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin ：模擬內質網應激；
b) Carbamazepine/ L-690，330/ Lithium Chloride（氯化鋰）：IMPase 抑制劑（即Inositol monophosphatase，肌醇單磷酸酶）；
c) Earle's平衡鹽溶液：制造饑餓；
d) N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide）：Class I PI3K Pathway抑制劑；
e) Rapamycin：mTOR抑制劑；
f) Xestospongin B/C：IP3R阻滯劑。
2、自噬抑制劑
a) 自噬抑制劑3-Methyladenine（3-MA）：(Class III PI3K) hVps34 抑制劑；
b) Bafilomycin A1：質子泵抑制劑；
c) 溶酶體抑制劑Hydroxychloroquine（羥氯喹）。


3、自噬檢測
1) 透射電鏡；
電鏡作為自噬檢測的金指標。由于自噬體屬于亞細胞結構，普通光鏡下觀察不到自噬體的形成，因此，直接觀察自噬體需在透射電鏡下。Phagophore的特征為：新月狀或杯狀，雙層或多層膜，有包繞胞漿成分的趨勢。自噬體（AV1）的特征為：雙層或多層膜的液泡狀結構，內含胞漿成分，如線粒體、內質網、核糖體等。自噬溶酶體（AV2）的特征為：單層膜，胞漿成分已降解。
2) WB檢測標志物LC3/Atg8、p62/SQSTM1、Lamps、Atg5、Atg14和Beclin-1；
a）利用Western Blot檢測LC3-II/I比值的變化以評價自噬形成。自噬形成時，胞漿型LC3（即LC3-I）會酶解掉一小段多肽，轉變為（自噬體）膜型（即LC3-II），因此，LC3-II/I比值的大小可估計自噬水平的高低。
b）利用Western Blot檢測p62蛋白來評價自噬以及自噬流的強弱：p62蛋白水平的多少與自噬流的強弱有著反比例關系。
3) 組織蛋白酶Cathepsin活力檢測；
4) IF檢測自噬潮autophagic flux。


三、自噬研究常規思路
通常情況下，除了研究自噬現象本身，大家geng多的是將自噬與各種生命活動或者疾病結合起來，把自噬作為這些方向的一個機制來研究。比如研究自噬如何參與腫瘤的發生發展、如何參與腫瘤的耐藥性與復發轉移、如何參與腫瘤免疫治療的效果、如何參與炎癥反應、如何參與氧化應激，如何參與自閉癥、阿爾茲海默癥的發生與治療等，通常的研究模式：
1）證明自噬參與了相關研究表型（電鏡、LC3II/I-WB、LC3亞細胞定位、LC3熒光示蹤監測自噬流等）
2）證明自噬在表型中起到關鍵作用（通過自噬抑制劑、激動劑進行關聯研究）
3）找到表型與自噬橋梁分子（檢測pI3K通路、Beclin-1、ATG家族各成員）
4）在基因層面通過gain of/lost of function研究橋梁分子在自噬中的作用。
古朵生物可以為客戶提供從自噬領域的課題設計到實驗操作包括后續實驗結果的整理等服務。


四、自噬相關研究領域
1）自噬起始和終止的分子機制
2）細胞自噬與腫瘤
3）細胞自噬與免疫
4）自噬參與炎癥信號通路的調節
5）細胞自噬與神經退行性疾病
6）激活自噬促進免疫化療和放療
7）表觀遺傳學與細胞自噬的關系
8）藥物治療