細菌的純種分離培養和接種技術
培養基的制備原理
培養基是人工地將多種物質按各種微生物生長的需要配置而成的一種混和營養基質，用以培養或分離各種微生物。因此，營養基質應當有微生物所能利用的營養成分（包括碳源、氮源、能源、無機鹽、生長因素）和水。根據微生物的種類和實驗目的不同，培養基也有不同的種類和配制方法。
操作步驟
1、計算稱量 根據配方，計算出實驗中各種藥品所需要的量，然后分別稱(量)取。
2、溶解 一船情況下，幾種藥品可一起倒入燒杯內、先加入少于所需要的總體積水進行加熱溶解。加熱溶解時，要不斷攪拌。如有瓊脂在內，應注意。待完全溶解后，補足水分到需要的總體積。
3、調節pH 用滴管逐滴加入1N NaOH或lN HCl邊攪動；邊用pH試紙測其pH值，直到符合要求時為止。
4、過濾 要趁熱用四層紗布或濾紙過濾。
5、分裝 按照實驗要求進行分裝。
6、加塞 培養基分裝好以后，在試管口或燒瓶口上應加上棉塞。
7、滅菌 在塞上棉塞的容器外面再包一層牛皮紙，便可進行滅菌。
細菌的的分離與接種技術
生長上應用的菌種必須是純種，但是篩選菌種時通過增殖培養后得到的菌種并不是純種，還需進行純種分離；就是在生產上長期應用的菌種，由于長期使用，也容易發生退化與變異，也需進行純種分離。因此純種分離是微生物學的主要技術之一，操作務必熟練。常用接種方法有：固體培養基接種、半固體培養基接種、液體培養基接種。
材料
1.菌種：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌
2.接種工具： 接種環、酒精燈、接種箱
方法
1.固體培養基：
（1）連續劃線適合于接種材料中含菌不太多的標本（如尿液等）或培養物。
（2）分區劃線適合于糞便等含菌量較多的標本或污染菌種的分離純化。
在培養皿底部注明接種菌名、接種者姓名、日期等，將平皿倒置于37℃溫箱中。（為什么？）
（準備室應給準備好分區劃線和連續劃線的示教）
2.半固體培養基：穿刺接種
不可穿至管底（3/4），循原路退出。37℃溫箱中培養。
今年為新換菌種（變形桿菌），動力很好。
3.液體培養基：
取標本后在接近液面的管壁上輕輕研磨，并粘取少許肉湯調和，使細菌混合于肉湯中。37℃溫箱中培養。
觀察細菌的生長現象
不同種類的細菌在培養基上生長，往往表現為不同的生長現象，可以通過生長現象的觀察，進行細菌的初步鑒定。
材料
菌種：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、乙型鏈球菌、變形桿菌
培養基：固體培養基、液體培養基、半固體培養基
操作
1．固體培養基多用于觀察細菌的菌落、菌苔、細菌的分離培養或純培養。
可將菌落分為三個類型：
（1）光滑型菌落（Smooth type co
（2）粗糙型菌落（Rough type co
（3）粘液型菌落（Mucoid type co
固體平板上，菌量多的部分，菌落常融合成片，形成菌苔，菌苔一般不做為鑒定的指標。
2．半固體培養基多用于觀察細菌的動力。（金黃色葡萄球菌、變形桿菌）
在半固體培養基中，無鞭毛細菌沿接種線生長，接種線清晰，培養基澄清；有鞭毛細菌彌散生長，接種線模糊不清，周圍培養基變混濁；借此可以判斷細菌有無動力。
3．液體培養基接種多用于測定細菌的生化反應（肉湯、葡萄糖蛋白胨水、各種單糖發酵管等液體培養基）、工業微生物發酵、觀察細菌的不同生長現象。
肉湯在未接種細菌前是澄清的，接種細菌后可有以下三種生長現象：
（1）混濁生長：液體變混濁。 （大腸桿菌）
（2）沉淀生長：上層培養液澄清，管底有絮狀或顆粒狀沉淀物。（鏈球菌）
（3）形成菌膜：培養液澄清，表面形成一層菌膜。 （枯草桿菌）哪些細菌在液體培養基中可形成菌膜？
細菌的分布
細菌種類多、繁殖快、適應環境能力強，因此，細菌廣泛分布于自然界，在水、土壤、空氣、食物、人和動物的體表以及與外界相通的腔道中，常有各種細菌和其它微生物存在。在自然界物質循環上起重要作用，多數對人類有益，對人致病的只是少數。
材料
1、普通固體培養基 血瓊脂平板
2、碘酒、肥皂、自來水等
方法
1、空氣中的細菌大多為非致病菌，是實驗操作污染的重要來源。檢查時用普通瓊脂平板，打開平板蓋，放置10min。37℃溫箱中培養。
2、手指上有細菌存在，檢查消毒前后細菌分布情況說明為什么要飯前便后要洗手，病從口入的道理。選擇男女各一名同學。
3、飛沫中有細菌，說明為什么不要對著人咳嗽、打噴嚏，不僅不禮貌，從微生物學角度來說，可以傳播一些疾病。（檢查飛沫中的細菌為什么要用血瓊脂平板）。
微生物不僅在自然界分布廣泛，在人體的體表以及與外界相通的腔道，存在著不同種類和數量的微生物。成年人體有1013個細胞，而細菌卻可達1014，其重量達1271g，近3斤，其中腸道中有1000g，糞便干重的1/3是細菌，皮膚上有200g，口腔、鼻腔、外耳道、泌尿生殖道、眼部有71g。
微生物種類繁多、分布廣泛，建立起“微生物無處不有的概念”， 嚴格無菌操作，樹立牢固的無菌觀念。
注意事項
是否R型菌落的細菌致病性都弱？比較日照與濟寧空氣質量。下次實驗看細菌分布實驗的結果。注意無菌操作，培養樹立牢固的無菌概念是微生物學實驗的一項重要任務
培養基是人工地將多種物質按各種微生物生長的需要配置而成的一種混和營養基質，用以培養或分離各種微生物。因此，營養基質應當有微生物所能利用的營養成分（包括碳源、氮源、能源、無機鹽、生長因素）和水。根據微生物的種類和實驗目的不同，培養基也有不同的種類和配制方法。
操作步驟
1、計算稱量 根據配方，計算出實驗中各種藥品所需要的量，然后分別稱(量)取。
2、溶解 一船情況下，幾種藥品可一起倒入燒杯內、先加入少于所需要的總體積水進行加熱溶解。加熱溶解時，要不斷攪拌。如有瓊脂在內，應注意。待完全溶解后，補足水分到需要的總體積。
3、調節pH 用滴管逐滴加入1N NaOH或lN HCl邊攪動；邊用pH試紙測其pH值，直到符合要求時為止。
4、過濾 要趁熱用四層紗布或濾紙過濾。
5、分裝 按照實驗要求進行分裝。
6、加塞 培養基分裝好以后，在試管口或燒瓶口上應加上棉塞。
7、滅菌 在塞上棉塞的容器外面再包一層牛皮紙，便可進行滅菌。
細菌的的分離與接種技術
生長上應用的菌種必須是純種，但是篩選菌種時通過增殖培養后得到的菌種并不是純種，還需進行純種分離；就是在生產上長期應用的菌種，由于長期使用，也容易發生退化與變異，也需進行純種分離。因此純種分離是微生物學的主要技術之一，操作務必熟練。常用接種方法有：固體培養基接種、半固體培養基接種、液體培養基接種。
材料
1.菌種：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌
2.接種工具： 接種環、酒精燈、接種箱
方法
1.固體培養基：
（1）連續劃線適合于接種材料中含菌不太多的標本（如尿液等）或培養物。
（2）分區劃線適合于糞便等含菌量較多的標本或污染菌種的分離純化。
在培養皿底部注明接種菌名、接種者姓名、日期等，將平皿倒置于37℃溫箱中。（為什么？）
（準備室應給準備好分區劃線和連續劃線的示教）
2.半固體培養基：穿刺接種
不可穿至管底（3/4），循原路退出。37℃溫箱中培養。
今年為新換菌種（變形桿菌），動力很好。
3.液體培養基：
取標本后在接近液面的管壁上輕輕研磨，并粘取少許肉湯調和，使細菌混合于肉湯中。37℃溫箱中培養。
觀察細菌的生長現象
不同種類的細菌在培養基上生長，往往表現為不同的生長現象，可以通過生長現象的觀察，進行細菌的初步鑒定。
材料
菌種：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、乙型鏈球菌、變形桿菌
培養基：固體培養基、液體培養基、半固體培養基
操作
1．固體培養基多用于觀察細菌的菌落、菌苔、細菌的分離培養或純培養。
可將菌落分為三個類型：
（1）光滑型菌落（Smooth type co
（2）粗糙型菌落（Rough type co
（3）粘液型菌落（Mucoid type co
固體平板上，菌量多的部分，菌落常融合成片，形成菌苔，菌苔一般不做為鑒定的指標。
2．半固體培養基多用于觀察細菌的動力。（金黃色葡萄球菌、變形桿菌）
在半固體培養基中，無鞭毛細菌沿接種線生長，接種線清晰，培養基澄清；有鞭毛細菌彌散生長，接種線模糊不清，周圍培養基變混濁；借此可以判斷細菌有無動力。
3．液體培養基接種多用于測定細菌的生化反應（肉湯、葡萄糖蛋白胨水、各種單糖發酵管等液體培養基）、工業微生物發酵、觀察細菌的不同生長現象。
肉湯在未接種細菌前是澄清的，接種細菌后可有以下三種生長現象：
（1）混濁生長：液體變混濁。 （大腸桿菌）
（2）沉淀生長：上層培養液澄清，管底有絮狀或顆粒狀沉淀物。（鏈球菌）
（3）形成菌膜：培養液澄清，表面形成一層菌膜。 （枯草桿菌）哪些細菌在液體培養基中可形成菌膜？
細菌的分布
細菌種類多、繁殖快、適應環境能力強，因此，細菌廣泛分布于自然界，在水、土壤、空氣、食物、人和動物的體表以及與外界相通的腔道中，常有各種細菌和其它微生物存在。在自然界物質循環上起重要作用，多數對人類有益，對人致病的只是少數。
材料
1、普通固體培養基 血瓊脂平板
2、碘酒、肥皂、自來水等
方法
1、空氣中的細菌大多為非致病菌，是實驗操作污染的重要來源。檢查時用普通瓊脂平板，打開平板蓋，放置10min。37℃溫箱中培養。
2、手指上有細菌存在，檢查消毒前后細菌分布情況說明為什么要飯前便后要洗手，病從口入的道理。選擇男女各一名同學。
3、飛沫中有細菌，說明為什么不要對著人咳嗽、打噴嚏，不僅不禮貌，從微生物學角度來說，可以傳播一些疾病。（檢查飛沫中的細菌為什么要用血瓊脂平板）。
微生物不僅在自然界分布廣泛，在人體的體表以及與外界相通的腔道，存在著不同種類和數量的微生物。成年人體有1013個細胞，而細菌卻可達1014，其重量達1271g，近3斤，其中腸道中有1000g，糞便干重的1/3是細菌，皮膚上有200g，口腔、鼻腔、外耳道、泌尿生殖道、眼部有71g。
微生物種類繁多、分布廣泛，建立起“微生物無處不有的概念”， 嚴格無菌操作，樹立牢固的無菌觀念。
注意事項
是否R型菌落的細菌致病性都弱？比較日照與濟寧空氣質量。下次實驗看細菌分布實驗的結果。注意無菌操作，培養樹立牢固的無菌概念是微生物學實驗的一項重要任務
