薄層色譜的分離原理、條件選擇和操作方法
一、薄層色譜概念
chang用的薄層色譜也屬于液-固吸附色譜。同柱色譜不同的是吸附劑被涂布在玻璃板上，形成薄薄的平面涂層。干燥后在涂層的一端點樣，豎直放入一個盛有少量展開劑的的有蓋容器中。展開劑接觸到吸附劑涂層，借毛細作用向上移動。與柱色譜過程相同，經過在吸附劑和展開劑之間的多次吸附-溶解作用，將混合物中各組分分離成孤立的樣點，實現混合物的分離。
除了固定相的形狀和展開劑的移動方向不同以外，薄層色譜和柱色譜在分離原理上基本相同。由于薄層色譜操作簡單，試樣和展開劑用量少，展開速度快，所以經常被用于探索柱色譜分離條件和監測柱色譜過程。
二、薄層色譜條件
⑴固定相選擇
柱色譜中提到的吸附劑都可以用作為薄層色譜的固定相，分離性能及使用選擇同柱色譜的選擇原則相同一般用于薄層色譜時，要求吸附劑的粒度小。商品吸附劑區分為色譜級（用于柱色譜）和薄層色譜級（用于薄層色譜）。
⑵展開劑選擇
薄層色譜展開劑的選擇和柱色譜一樣，主要根據樣品中各組分的極性、溶劑對于樣品中各組分溶解度等因素來考慮。展開劑的極性越大，對化合物的洗脫力也越大選擇展開劑時，除參照表列溶劑極性來選擇外，多地采用試驗的方法，在一塊薄層板上進行試驗：
①若所選展開劑使混合物中所有的組分點都移到了溶劑前沿，此溶劑的極性過強；
②若所選展開劑幾乎不能使混合物中的組分點移動，留在了原點上，此溶劑的極性過弱。
當一種溶劑不能很好地展開各組分時，常選擇用混合溶劑作為展開劑。先用一種極性較小的溶劑為基礎溶劑展開混合物，若展開不好，用極性較大的溶劑與前一溶劑混合，調整極性，再次試驗，直到選出合適的展開劑組合。合適的混合展開劑常需多次仔細選擇才能確定。
⑶相對移動值從點樣原點開始到展開后的溶劑前沿，是溶劑的移動距離，記為lo，混合物中各組分的移動距離分別記為l1，l2，l3…。
⑷顯色
分離的化合物若有顏色，很容易識別出來各個樣點。但多數情況下化合物沒有顏色，要識別樣點，必須使樣點顯色。通用的顯色方法有碘蒸氣顯色和紫外線顯色。
①碘蒸氣顯色：將展開的薄層板揮發干展開劑后，放在盛有碘晶體的封閉容器中，升華產生的碘蒸氣能與有機物分子形成有色的締合物，完成顯色。
②紫外線顯色：用摻有熒光劑的固定相材料（如硅膠F，氧化鋁F等）制板，展開后在用紫外線照射展開的干燥薄層板，板上的有機物會吸收紫外線，在板上出現相應的色點，可以被觀察到。
有時對于特殊有機物使用專用的顯色劑顯色。此時常用盛有顯色劑溶液的噴霧器噴板顯色。
三、薄層色譜操作（見視頻“色譜裝置與操作”）
⑴制板（以硅膠板為例）
選擇合適的玻璃板（經常使用顯微鏡上的載玻片），依次用水和乙醇洗凈，晾干。取適量薄層色譜用的硅膠，加適量蒸餾水調成糊。調制時慢慢攪拌，勿使產生氣泡。將糊倒在玻璃板上，搖動攤平，晾干。使用前放入烘箱內，在105-115oC左右烘干40-50分鐘。冷卻后使用。
⑵點樣
將試樣用少量展開劑溶解，用毛細管蘸取試樣溶液，在薄層板上點樣。在樣點上輕輕畫出一條平行于玻璃板底邊的細線。薄層色譜板載樣量有限，勿使點樣量過多。
⑶展開
吹干樣點，豎直放入盛有展開劑的有蓋展開瓶中。展開劑要接觸到吸附劑下沿，但切勿接觸到樣點。蓋上蓋子，展開。待展開劑上行到一定高度（由試驗確定適當的展開高度），取出薄層板，再畫出展開劑的前沿線。
⑷顯色，計算Rf值
揮發干展開劑，選擇合適的顯色方法顯色。量出展開劑和各組分的移動距離，計算各組分的相對移動值。
四、薄層色譜應用
⑴可用于判斷兩個化合物是否相同（同一展開條件下是否有相同的移動值）；
⑵可用于確定混合物中含有的組分數；
⑶可用于為柱色譜選擇合適的展開劑，監視柱色譜分離狀況和效果；
⑷可用于檢測反應過程。
