古朵生物|Bradford蛋白定量試劑盒
產品描述
Bradford蛋白濃度測定法是目前常用的靈敏度較高的蛋白濃度測定方法之一。它是根據Bradford染液（考馬斯亮藍G-250染料）與蛋白結合，使染料的大吸收峰從A456變為A595，且測定的吸光值與蛋白濃度成正比關系的原理設計的。本法通過吸光值，推算蛋白濃度，實現了蛋白濃度測定的快速性和簡便性。靈敏度高，比Lowry法大約高四倍，低蛋白檢測量可達1μg。測定速度快、簡單，僅需一種試劑即可，且不受大多數樣品中化學試劑的影響。
古朵生物提供二種規格的Bradford蛋白濃度檢測試劑盒，比色皿法分別可做125次和625次。酶標法分別可做500次和2500次。
產品組分
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編號 |
組分 |
產品編號/規格 |
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20202ES76 (500T) |
20202ES86 (2500T) |
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20202-A |
Bradford蛋白染色液 |
125mL |
5×125 mL |
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20202-B |
蛋白標準品（BSA） |
5×1mL（2mg/mL） |
5×2mL（2mg/mL） |
運輸與保存方法
冰袋運輸。
染色液4℃保存，蛋白標準品常溫或4℃保存，有效期一年。
注意事項
1）Bradford染色液使用前，應充分混勻。同時，酶標儀需預熱20min。
2）Bradford染色液需恢復到室溫再使用，有利于提高檢測的靈敏度。另，使用前需顛倒幾次以充分混勻。
3）由于Bradford染液的顏色反應并不是同遞增的蛋白濃度呈線性關系，因此每次試驗都必須建立標準曲線。另外，為了得到的結果，每個蛋白梯度和樣品均需做復孔。
4）Bradford法測定蛋白濃度對大多數化學物質的兼容性比較好，比如對還原劑DTT的兼容性高達5mM。但會受到略高濃度的去垢劑影響，如，SDS需低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20/ 60/80低于0.015%等。對于含去垢劑的樣品，建議使用BCA增強型蛋白定量檢測試劑盒【貨號：20201ES76】。
5）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
6）本產品僅作科研用途！
操作方法
一、配制標準品
1. 配制BSA標準品體系
注：標準品稀釋液為蛋白樣品的溶解液，原則上蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS進行稀釋。
BSA標準品體系配制可參考表一。
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Vial |
稀釋液體積(μL) |
2mg/mL BSA體積(μL) |
BSA終濃度(μg/mL) |
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A |
0 |
100 |
2000 |
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B |
25 |
75 |
1500 |
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C |
50 |
50 |
1000 |
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D |
125 |
75 |
750 |
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E |
150 |
50 |
500 |
|
F |
350 |
50 |
250 |
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G |
375 |
25 |
125 |
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H |
395 |
5 |
25 |
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I |
400 |
0 |
0=Blank |
A. 標準比色皿檢測（線性范圍：100-1500μg/mL）
1. 各取20μL不同濃度標準品和待測樣品加入到反應管中；
2. 加入1mL Bradford染色液，混勻。室溫孵育10min。【注】：樣本室溫孵育時間不可超過1h；
3. 分光光度計上測定595nm處的吸光度，用裝滿水的比色皿對儀器校零。之后測定所有樣本濃度。
4. 根據BSA標準品的吸光度（減去標準品中空白孔的OD值即終的讀數），繪制標準曲線（X-蛋白濃度μg/mL；Y-終的OD595nm）。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。
B. 標準微孔板檢測（線性范圍：100-1500μg/ml）
1. 各取5μL各濃度標準品和待測樣品加入到微孔板中；
2. 每孔加入250μL Bradford染色液，振蕩30s充分混勻。蓋上微孔板，室溫孵育10min。【注】：樣本室溫孵育時間不可超過1h；
3. 酶標儀上測定595nm處的吸光度。或者其他575-615nm波長范圍內的吸光度，但是相對于595nm，吸光度會存在0-10%的損失。
4. 根據BSA標準品的吸光度（減去標準品中空白孔的OD值即終的讀數），繪制標準曲線（X-蛋白濃度μg/mL；Y-終的OD595nm）。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。
注：a）由于酶標板的光徑比比色皿短，經酶標板檢測得到的OD595nm會低于比色皿檢測所得，因此可能降低本法的檢測下限。要得到高的OD595nm，可使用7-10μL標準品/待檢樣本，和250μL Bradford染色液來進行檢測。b）如果使用與酶標儀相關的曲線擬合算法（curve fitting algorithm），那么四參數或者佳擬合曲線可能得到為的結果，并不是單純的線性擬合。若是手動標記各點濃度，點-點曲線出來的結果于線性擬合。若對結果準確性的要求不是非常嚴格，可使用線性擬合分析數據。
