古朵闡述：ELISA實驗中為什么時常會出現(xiàn)復測現(xiàn)象
古朵闡述：ELISA實驗中為什么時常會出現(xiàn)復測現(xiàn)象
在ELISA實驗過程中時常會出現(xiàn)復測現(xiàn)象，即我們時常說的"花板"現(xiàn)象，這種現(xiàn)象影響檢驗結(jié)果的正確判讀，對工作造成一定的不利影響，一旦出現(xiàn)“花板”，實驗結(jié)果必須放棄，重新進行，不僅浪費物料和時間，而且還會出現(xiàn)樣本量缺少、交叉污染、報告延遲等一系列問題。
出現(xiàn)這現(xiàn)象的影響因素分析如下
1、標本因素
正確處理標本，防止大規(guī)模溶血、血漿層異物、使用一次性加樣槍頭，防止交叉污染。血清和血漿均可以用于檢測，但血清的分離應在抽血后等血液完全凝固后再離心。
2、試劑因素
正確保存及使用有效試劑。使用過期試劑及底物接觸金屬容器、底物混合后放置時間較長均影響實驗結(jié)果的準確性。選擇試劑時應選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好，批間差小的試劑。不同廠家的試劑不能混用，包括底物和洗滌液。檢測前應將試劑放置室溫平衡半小時，洗滌液應現(xiàn)用現(xiàn)配，同時觀察濃縮洗滌液中有無結(jié)晶，若有結(jié)晶應放37℃水浴中融化后才可使用。
3、技術(shù)人員操作因素
嚴格按照相關(guān)實驗SOP操作實驗。加樣時應盡可能的垂直加樣，并加在包被孔的底部(注：勿應用力過度破壞底部包被物質(zhì))，不可加在孔的上部及外部。
4、溫浴的因素
使用水浴箱作為溫浴設備時，應注意水的深淺對結(jié)果的影響，當水浴箱中水的的實測溫度37℃時，則水面溫度可能只有34℃，空氣溫度低，甚至只有二十多度，所以當水浴箱中水位過低時則酶標微孔板沒有浸入水中，則反應溫度會達不到37℃，相應的就會影響酶促反應。為防止邊緣效應，酶標板應盡量浸入水中，以保證受熱的均勻。水浴時，酶標板應封好，以免水滴滴入包被孔中，或陽性標本的蒸發(fā)。嚴格掌握溫浴時間，不可為了早點出結(jié)果擅自縮短溫浴時間。
5、洗板機的因素
廢液瓶裝滿后應及時清空，以防止廢液回流對管道的污染，而使洗滌不徹底，造成“花板”。洗板結(jié)束后應用蒸餾水徹底清洗管道，以防止廢液在管道中的殘留。同時應根據(jù)儀器維護保養(yǎng)程序，定期對洗板機進行維護保養(yǎng)。
6、酶標儀
酶標儀應安置在避光條件下，比色前應提前15-30分鐘開機預熱，這樣測定結(jié)果會穩(wěn)定。為防止顯色的加深或減弱，顯色時間完成后應立即滴加終止液(避免氣泡產(chǎn)生)，并在10分鐘內(nèi)完成比色。酶標板從水浴箱取出后應擦凈孔底水滴，若有水滴或紙屑殘留在孔底，會造成酶標儀讀數(shù)錯誤，誤判定為“花板”。
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