【古朵生物】ELISA方法的基本用途及操作程
【古朵生物】ELISA方法的基本用途及操作程序
1、直接ELISA試劑盒
本法首要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎(DVH)抗體的ELISA為例，直接ELISA的操作程序如下：
(1) 資料
① 包被液、洗刷液、保溫液、底物液、停止液;
② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參閱血清;待檢鴨血清;
③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。
(2) 方法過程
① 加抗原包被 → 4℃過夜，洗刷三次、拋干
② 加待檢血清 → 37℃ 2小時，洗刷三次、拋干
③ 加酶標抗體 → 37℃ 2小時，洗刷三次、拋干
④ 加底物液 → 37℃ 30分鐘，加停止液
⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值，并計算出P/N比值。
(3) 成果判定 已知陽性血清與已知陰性血清的比值(P/N)≥2.1，并且已知陽性血清的OD值≥0.4;在上述條件建立的情況下，如果待檢血清與已知陰性血清的比值(P/N)≥2.1，并且待檢血清的OD值≥0.4，則判為陽性，不然判為陰性。
2、雙抗體夾心ELISA試劑盒
本法首要用于檢測大分子抗原?，F以檢測雞傳染性法氏囊病病毒(IBDV)的雙夾心抗體ELISA為例介紹本法的操作程序。
① 加抗體包被 → 4℃過夜，洗刷三次、拋干
② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗刷三次、拋干
③ 加酶標抗體 → 37℃ 30分鐘，洗刷三次、拋干
④ 加底物液 → 37℃ 15分鐘，加停止液
⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。
3、雙夾心ELISA試劑盒
此法與雙抗體夾心ELISA的首要差異在于：它是采用酶標抗抗體查看多種大分子抗原，它不只不用符號每一種抗體，還可進步試驗的敏感性。
此法的根本程序為：
① 加抗體(Ab-1)包被 → 4℃過夜，洗刷三次、拋干
② 加待檢抗原(Ag) → 37℃ 60分鐘，洗刷三次、拋干
③ 加用非同種動物出產的特異性抗體(Ab-2)→ 37℃ 60分鐘，洗刷三次、拋干
④ 加入酶標抗Ab-2抗體(AB-3)→ 37℃ 60分鐘，洗刷三次、拋干
⑤ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加停止液
⑥ 用ELISA檢測儀測定OD值。
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