產(chǎn)品名：人B因子(BF)ELISA試劑盒

  英文名：Human factor B,BF ELISA Kit

  實驗原理：本試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知待測物質濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將待測物質和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中指標的濃度呈比例關系。

  自備材料：

  1. 蒸餾水。

  2. 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

  3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

  樣品收集、處理及保存方法：

  1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

  2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

  3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘除顆粒和聚合物。

  4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

  5、 保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或geng高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

  操作注意事項：

  試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

  實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

  不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

  使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

  使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

  底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

  加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

  按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

  安全性：

  1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

  2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

  3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

  試劑盒性能：

  1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。

  2. 特異性：不與其它細胞因子反應。

  3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

  操作步驟：

  1. 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

  2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

  3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。

  4. 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

  5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

  6. 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

  7. 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。

  8. 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

  9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。

  結果判斷與分析：

  1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

  2、以吸光度OD值為縱坐標(Y)，相應的指標標準品濃度為橫坐標(X)，做得相應的曲線，樣品的含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度, 再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

  人B因子(BF)ELISA試劑盒技術資料 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術相關產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發(fā)高質量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。