植物中脂氧合酶(LOX)試劑盒的測(cè)定原理是什么?
植物中脂氧合酶(LOX)試劑盒的測(cè)定原理是什么?
測(cè)定意義： LOX 廣泛存在于動(dòng)植物組織中，催化不飽和脂肪酸氧化反應(yīng)，導(dǎo)致膜脂過氧化。在生物體 的生長發(fā)育、成熟衰老及逆境脅迫過程中具有重要作用。
測(cè)定原理： LOX 催化亞油酸氧化，氧化產(chǎn)物在 280nm 處有特征吸收峰;測(cè)定 280nm 吸光度增加速率， 來計(jì)算 LOX 活性。
自備儀器和用品： 研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、可調(diào) 式移液槍和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。 試劑三：粉劑×1 支，4℃保存。
粗酶液提取： 按照組織質(zhì)量(g)：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心 20min，取上清置冰上待測(cè)。
測(cè)定： 1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長到 280 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 在試劑三中加入 10mL 試劑二(振蕩混勻 1min)，在 30℃水浴中預(yù)熱 10 min 以上。用不 完的試劑 4℃保存。
3. 對(duì)照管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 樣本和 180μL 試劑二，30℃反應(yīng) 30min 后，記錄 A 對(duì)照。
4. 測(cè)定管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 樣本和 180μL 試劑三，30℃反應(yīng) 30min 后，記錄 A 測(cè)定。 5. ΔA=A 測(cè)定-A 對(duì)照
LOX 活性計(jì)算：
(1)按照蛋白濃度計(jì)算 活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化 0.01 個(gè)單位為 1 個(gè)酶活單位。 LOX (U/mg prot) =ΔA×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T×100 = 33.33×ΔA÷Cpr
(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算 活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘催化吸光值變化 0.01 個(gè)單位為 1 個(gè)酶活單位。
LOX (U/g 鮮重) =ΔA×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T×100 = 33.33×ΔA÷W Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL
需另外測(cè)定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒; V 反總：反應(yīng)體系總體積，200μL=0.2mL;V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μL=0.02mL; W ：樣品質(zhì)量，g;V 樣總：上清液總體積，1mL;T：反應(yīng)時(shí)間，30min。
植物中脂氧合酶(LOX)試劑盒的測(cè)定原理
植物中脂氧合酶(LOX)試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。
