動(dòng)物血清的使用指南，你知道嗎?
動(dòng)物血清的使用指南，你知道嗎?
血清在細(xì)胞培養(yǎng)中為細(xì)胞提供氨基酸，蛋白質(zhì)，維生素(特別是脂溶性維生素如A，D，E，K)，碳水化合物，脂肪，激素，生長(zhǎng)因子，礦物質(zhì)及微量元素。此外，血清還可以緩沖培養(yǎng)基，抑制蛋白水解酶，增加培養(yǎng)基的粘度，降低在移液或攪拌時(shí)造成的剪切力。
對(duì)于動(dòng)物血清的正確使用，這里做一個(gè)簡(jiǎn)單的說明。
1、儲(chǔ)存
血清的保質(zhì)期是5年，儲(chǔ)存溫度-10 ~ -30℃。
血清長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，長(zhǎng)期保存血清必須在-10℃以下儲(chǔ)存，并避免反復(fù)凍融。
2、解凍
將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
如果在37℃或高的溫度解凍血清，血清中會(huì)出現(xiàn)沉淀。此沉淀可能包括磷酸鈣結(jié)晶，但不改變血清的性能，同樣血清熱滅活也會(huì)導(dǎo)致沉淀的形成。
3、渾濁和沉淀
所有的血清可能保留一些纖維蛋白原。某些外部因素可能引發(fā)纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白，導(dǎo)致血清解凍后可能會(huì)觀察到絮狀物或混濁。這些物質(zhì)的存在不會(huì)改變血清的性能。
如果想去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝到無(wú)菌離心管中，以低速離心1~2min，上清液即可直接加入到培養(yǎng)基內(nèi)使用。
注意：不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)檫@可能阻塞濾膜。
4、熱滅活處理
通常不使用熱滅活血清，除非某些特定的細(xì)胞系特別需要。熱滅活會(huì)降低或破壞血清中的生長(zhǎng)因子，影響某些細(xì)胞的生長(zhǎng)。
熱滅活zui初是為了滅活補(bǔ)體及支原體。目前，如果血清中出現(xiàn)支原體，可以通過過濾去除;而去除補(bǔ)體通常是不必要的，除非是在準(zhǔn)備或檢測(cè)病毒或細(xì)胞毒性試驗(yàn)時(shí)。有研究顯示，血清37℃孵育就可以滅活血清中熱不穩(wěn)定的補(bǔ)體成分，只有很少一部分細(xì)胞在這種滅活血清中生長(zhǎng)得好，如胚胎干細(xì)胞和許多昆蟲細(xì)胞。
1)按正確操作解凍血清，恢復(fù)室溫。
2)水浴56℃提前預(yù)熱。
3)將準(zhǔn)備好的血清和裝有相同體積水的燒杯同時(shí)放入水浴鍋，當(dāng)燒杯中的溫度計(jì)指示達(dá)到56℃時(shí)開始計(jì)時(shí)，滅活30min后結(jié)束，整個(gè)過程中需要隨時(shí)搖晃混勻。
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