人α1微球蛋白ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

  檢測(cè)中樣品的處理：

  1.細(xì)胞培養(yǎng)物上清：細(xì)胞培養(yǎng)物于室溫1000g，離心10分鐘后收集上清，并將標(biāo)本保存于-20℃，且應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  2.血清：標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000g，4℃離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  3.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃,1000g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  4.尿液：無菌收集取初尿，離心除去沉淀物，即可用于檢測(cè)，要長(zhǎng)期保存尿樣，可以加入0.05%的NaN3在4-8℃保存，或加入尿樣冰凍保護(hù)液放入-20℃冰箱長(zhǎng)期保存。

  5.組織勻漿：將組織標(biāo)本先用PBS洗滌，除去多余血液，勻漿化后放在PBS于-20℃放置過夜，再經(jīng)過二次反復(fù)凍融破膜，5000g，4℃離心5分鐘，取上清即可檢測(cè)。注：取樣和樣品處理過程中，防止有毒物質(zhì)對(duì)操作人員的危害，要采取相應(yīng)的保護(hù)措施。

  人α1微球蛋白ELISA試劑盒使用原理:

  1，ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。

  2，結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。

  3，在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。

  4，用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。

  5，此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

  6，由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。

  人α1微球蛋白ELISA試劑盒注意事項(xiàng)：

  1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

  2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

  3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

  4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

  5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

  6.底物請(qǐng)避光保存。

  7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

  8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

  9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

  10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

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