小知識：重組蛋白溶解復溶緩沖液和載體蛋白
小知識：重組蛋白溶解復溶緩沖液和載體蛋白
干粉形式的重組蛋白在常溫下能夠保持穩定，大多數 MCE 重組蛋白以干粉形式發貨。凍干粉在使用前需進行溶解，這時候會常看到一位陌生又熟悉的“朋友”——載體蛋白。
溶解教學：
1: 判斷實驗周期。短期實驗<=7 天，溶解材料：復溶緩沖液;長期實驗>=7 天，溶解材料：復溶緩沖液、載體蛋白。
2: 開蓋前離心。凍干粉在運輸過程中，會因為外力因素粘附于管壁或者管蓋上，在開蓋之前，先通過離心操作，將凍干粉收集于管底，避免損失和浪費。建議 10,000-12,000 rpm 高速離心 30 s;若沒有高速離心機，3,000-3,500 rpm 離心 5 min。
3: 短期實驗：向凍干粉中加入提供的復溶緩沖液，用槍頭輕輕吹打混勻，重懸至濃度不低于 100 μg/mL。分裝每管不少于 20 μL.
長期實驗：先用復溶緩沖液將蛋白溶解，再用含載體蛋白 (0.1% BSA，5% HSA，10% FBS，或 5% 海藻糖) 的溶液進一步稀釋，濃度不低于 100 μg/mL，然后分裝凍存于 -20°C 至 -80°C。
為什么重組蛋白要凍干?
蛋白質對熱非常敏感，蛋白質凍干可以使蛋白質的大部分活性得以保留，提高蛋白質的穩定性，延長儲存時間，同時降低運輸成本。但凍干可能導致蛋白質喪失部分活性、聚集和其他退化問題，需通過添加保護劑(穩定劑、添加劑、賦形劑) 和控制各種凍干條件以盡可能減少負面影響。MCE 大部分重組蛋白以凍干粉的形式提供，室溫下非常穩定，支持常溫運輸，為確保蛋白質 的活性，我們通常以冰袋運輸，建議收到產品后 -20℃ 或 -80 ℃ 保存。
我應該如何儲存重組蛋白?
對于長期儲存，蛋白質溶液應與載體蛋白 (例如 0.1% BSA、10% FBS、5% HSA 和 5% 海藻糖) 分裝保存，并在 -20°C 至 -80°C 下冷凍保存。在分裝凍存前，建議用含載體蛋白的溶液進一步稀釋 (濃度不低于 100 μg/mL)。保存產品時請避免反復凍融，每個冷凍-解凍循環都可能導致蛋白質變性和降解。
載體蛋白使蛋白保存穩定的原理是什么?
塑料管壁對蛋白有很強的吸附作用，會導致重組蛋白粘附在管壁不易分離，進而導致溶液中重組蛋白的實際濃度偏低，終導致其活性下降。在復溶重組蛋白時，加入載體蛋可以預先封閉塑料管壁上蛋白結合位點，避免重組蛋白粘附于管壁。此外，載體蛋白也能維持蛋白在低溫條件下的穩定，使其保持活性。如果在重組蛋白凍干粉復溶后，不用含載體蛋白的溶液進一步稀釋，而是直接分裝凍存，則溶液中的大部分重組蛋白均會粘附到管壁上，導致溶液中實際溶解的細胞因子或重組蛋白的濃度大大降低，終表現為重組蛋白活性的下降。
含載體蛋白的溶液指的是什么溶液呢?水可以嗎?
為了維持一定的 pH 值跟鹽類濃度，避免蛋白不穩定，不建議用水，該溶液通常建議選擇 pH 近中性、有一定緩沖能力的緩沖液，如PBS、培養基 (RPMI1640, DMEM 等) 等。
海藻糖 or BSA 怎么選?
一般情況下，用于細胞或組織培養可以使用含有 BSA 載體的重組蛋白。但是，當進行某些實驗，如體內實驗、蛋白標記時，BSA 可能會干擾實驗，則不適合使用添加 BSA 的重組蛋白。另外，如果實驗平臺有特殊要求，也應根據要求選擇不含 BSA 的蛋白。做無血清培養或動物的體內實驗時，細胞因子中不能含有 BSA，FBS 或 HSA 等動物或人的蛋白，建議選擇5% 海藻糖作為載體蛋白。
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