人唾液皮質醇ELISA試劑盒操作說明
人唾液皮質醇ELISA試劑盒操作說明
本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中人唾液皮質醇的含量。
有效期：6個月
保存條件：2-8℃
人唾液皮質醇ELISA試劑盒實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人唾液皮質醇捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人唾液皮質醇呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，計算樣品濃度。
人唾液皮質醇ELISA試劑盒樣本處理及要求
血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 細胞培養物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
注：標本溶血會影響后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
需要而未提供的試劑和器材
酶標儀(450nm)
加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒溫箱
蒸餾水或去離子水
注意事項
嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。
避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
在儲存和溫育時避免強光直接照射。
平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
不能使用過期產品。
如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。
試劑準備
試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
操作步驟
從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(350μL)，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
實驗結果計算
以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。
試劑盒性能
檢測范圍：3.75 ng/mL – 120 ng/mL。
靈敏度：低檢測濃度小于0.1 ng/mL。
特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
重復性：板內變異系數小于10% ，板間變異系數小于15% 。
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