古朵新聞：蛋白含量的測(cè)定—考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒
古朵新聞：蛋白含量的測(cè)定—考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒
原理
蛋白質(zhì)分子具有-NH3+基團(tuán)，當(dāng)棕紅色的考馬斯亮藍(lán)顯色劑加入蛋白標(biāo)準(zhǔn)液或樣品中時(shí)，考馬斯亮藍(lán)染料上的陰離子和蛋白-NH3+結(jié)合，使溶液變?yōu)樗{(lán)色，通過(guò)測(cè)定吸光度可計(jì)算出蛋白含量。
試劑的配制
1、考馬斯亮藍(lán)貯備液 60×1瓶。臨用時(shí)按照所需量用蒸餾水1:4稀釋(即5倍稀釋)，配成應(yīng)用液，4℃貯存。
2、蛋白標(biāo)準(zhǔn)液 0.615g/L蛋白標(biāo)準(zhǔn)液1ml×1支，4℃貯存。
3、配制2%組織勻漿。
操作
1、樣本前處理 ①配制2%組織勻漿稱取待測(cè)組織的重量，按重量體積比加生理鹽水制備成10%的組織勻漿，1000-3000r/min，離心10min(根據(jù)所測(cè)指示不一樣，則所需轉(zhuǎn)速不一樣)，然后取組織勻漿上清再用生理鹽水按1:9稀釋成1%組織勻漿，或用生理鹽水按1:4稀釋成2%的組織勻漿待測(cè)。②血清可用生理鹽水按血清：生理鹽水1:49稀釋，待測(cè)。
總的來(lái)說(shuō)，測(cè)定范圍為1g/L(mg/ml)左右為宜，請(qǐng)?jiān)谂繙y(cè)試前先做1~2個(gè)樣本的預(yù)試。
2、按表操作
蛋白含量操作步驟
試劑
空白管
標(biāo)準(zhǔn)管
測(cè)定管
DDH2O(ml)0.05
1g/L標(biāo)準(zhǔn)液(ml)—0.05—
樣品(ml)——0.05
考馬斯藍(lán)顯色劑(ml)3.03.03.0
混勻后靜置10min，于595nm波長(zhǎng)處比色(1cm光徑比色杯)，用空白管調(diào)零，測(cè)定各管的吸光度。
3、蛋白含量的計(jì)算
蛋白含量(g/L)=(測(cè)定管吸光度-空白管吸光度)/(標(biāo)準(zhǔn)管吸光度-空白管吸光度)×標(biāo)準(zhǔn)管濃度(g/L)
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