人白介素12(IL-12)試劑盒說明書

  檢測范圍： 96T

  1 ng/L -60 ng/L

  使用目的：

  人白介素12(IL-12)試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白介素12(IL-12)含量。

  實(shí)驗(yàn)原理

  人白介素12(IL-12)試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人白介素12(IL-12)水平。用純化的人白介素12(IL-12)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白介素12(IL-12)，再與HRP標(biāo)記的白介素12(IL-12)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素12(IL-12)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人白介素12(IL-12)濃度。

  試劑盒組成

  130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶

  2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(120ng/L)0.5ml×1瓶

  3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶

  4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

  5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張

  6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)

  標(biāo)本要求

  1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

  2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

  人白介素12(IL-12)試劑盒操作步驟

  1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

  60 ng/L5號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  30 ng/L4號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  15 ng/L3號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  7.5 ng/L2號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  3.75 ng/L1號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

  3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

  4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

  5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

  6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

  7. 溫育：操作同3。

  8. 洗滌：操作同5。

  9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

  10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

  11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

  人白介素12(IL-12)試劑盒注意事項(xiàng)

  1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

  2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

  3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

  4. 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計(jì)算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

  5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

  6.底物請避光保存。

  7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

  8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

  9.本試劑不同批號組分不得混用。

  10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

  保存條件及有效期

  1.人白介素12(IL-12)試劑盒保存：;2-8℃。

  2.有效期：6個(gè)月

  人白介素12(IL-12)試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。