大鼠弓形蟲IgG抗體 Elisa試劑盒說明書

  本產品僅供研究使用

  【試劑盒名稱】

  大鼠弓形蟲IgG抗體定量檢測試劑盒(ELISA)

  【試劑盒用途】

  定量檢測大鼠血清、血漿及相關液體樣本中弓形蟲IgG抗體的含量。

  【檢測原理】

  本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被大鼠弓形蟲IgG抗原透明酶標包被板中，溫育足夠時間后，洗滌除去未結合的成分，再加入酶標工作液，溫育足夠時間后，洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B，底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產物，在酸的作用下變成，顏色的深淺與樣品中大鼠弓形蟲IgG抗體濃度呈正相關，450nm波長下測定OD值，根據標準品和樣品的OD值，計算樣本中大鼠弓形蟲IgG抗體含量。

  【試劑盒組成】

  1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 ; 2 酶標試劑 6ml×1 瓶

  3 酶標包被板 12 孔×8 條 ; 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶

  5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 ; 6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶

  7 終止液 6ml×1 瓶; 8 標準品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶

  9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶; 10 說明書 1 份

  11 封板膜 2 張; 12 密封袋 1 個

  【操作步驟】

  1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘。

  2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

  3、加標準品和待測樣本：取足夠數量的酶標包被板，固定于框架上，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。

  4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

  5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。

  6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。

  7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

  8、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。

  9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s)，37℃避光顯色15min。

  10、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應(顏色由藍色立轉)。

  11、測定：以空白孔調零，在終止后15分鐘內，用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。

  12、計算：根據標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。

  【樣本要求】

  1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3)，因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。

  2、標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

  3、樣本應充分離心，不得有溶血及顆粒。

  【注意事項】

  1、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

  2、酶標包被板開封后如未用完，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

  3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。

  4、牢記樣本已經稀釋5倍，計算結果乘以5才是樣本實際濃度。

  5、本試劑盒定量范圍為0.5-16U/L，超過此范圍，為標準曲線延伸計算所得，不做為準確定量結果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果(0.5-16U/L范圍內)，乘以總稀釋倍數即為樣本zui終濃度。

  6、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間。

  7、為避免交叉污染，標準品、樣本和空白對照每加一個就要換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔;不得重復使用封板膜。

  8、試劑盒保質期內使用，不同批號的試劑不得混用。

  9、底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

  【操作程序總結】

  準備試劑，樣品和標準品

  加入準備好的樣品和標準品，37℃反應30分鐘

  洗板4次，加入酶標試劑，37℃反應30分鐘

  洗板4次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鐘

  加入終止液

  15分鐘之內讀OD值

  計算

  【檢測范圍】

  0.5U/L - 16U/L

  【規格】

  96人份/盒

  【貯藏】

  2-8℃，避光防潮保存。

  【有效期】

  6個月

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