雞球蛋白(GLB)elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)

  本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷

  雞(Chicken)球蛋白(GLB)ELISA檢測(cè)試劑盒

  使用說(shuō)明書(shū)

  檢測(cè)原理

  試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被球蛋白(GLB)抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的球蛋白(GLB)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值)，計(jì)算樣品濃度。

  樣品收集、處理及保存方法

  1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

  2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

  3. 細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

  4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

  5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

  自備物品

  酶標(biāo)儀(450nm)

  加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

  37℃恒溫箱

  操作注意事項(xiàng)

  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。

  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封(低溫干燥)保存。

  濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白;按照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍，終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

  嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

  所有液體組分使用前充分搖勻。

  試劑盒組成

  名稱96孔配置48孔配置備注

  微孔酶標(biāo)板12孔×8條12孔×4條無(wú)

  標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6管0.3mL*6管無(wú)

  樣本稀釋液6mL3mL無(wú)

  檢測(cè)抗體-HRP10mL5mL無(wú)

  20×洗滌緩沖液25mL15mL按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

  底物A6mL3mL無(wú)

  底物B6mL3mL無(wú)

  終止液6mL3mL無(wú)

  封板膜2張2張無(wú)

  說(shuō)明書(shū)1份1份無(wú)

  自封袋1個(gè)1個(gè)無(wú)

  注：標(biāo)準(zhǔn)品(S0-S5)濃度依次為：0、2.5、5、10、20、40 g/L

  試劑的準(zhǔn)備

  20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

  洗板方法

  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

  自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

  操作步驟

  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

  樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

  除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

  結(jié)果判斷

  繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

  試劑盒性能

  性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

  靈敏度：ZD檢測(cè)濃度小于1.0 g/L。

  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

  重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

  有效期：6個(gè)月

  免責(zé)聲明

  試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。

  嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

  ELISA 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門(mén)從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹(shù)立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開(kāi)發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。