大鼠磷酸二酯酶(PDE)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒使用說明書

  使用前仔細(xì)閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來檢測大鼠磷酸二酯酶(PDE)，只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

  用 途：用于大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中磷酸二酯酶(PDE)測定。

  工作原理:

  本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定樣品中大鼠磷酸二酯酶(PDE)水平。向預(yù)先包被了大鼠磷酸二酯酶(PDE)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入大鼠磷酸二酯酶(PDE)，溫育;溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗磷酸二酯酶(PDE)抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠磷酸二酯酶(PDE)的濃度呈正相關(guān)。

  試劑盒組成

  試劑盒組成48孔配置96孔配置保存

  說明書1份1份

  封板膜2片(48)2片(96)

  密封袋1個(gè)1個(gè)

  酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存

  標(biāo)準(zhǔn)品1600 ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存

  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存

  鏈霉親和素-HRP3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存

  生物素標(biāo)記的抗PDE抗體0.5ml×1瓶1 ml×1瓶2-8℃保存

  顯色劑A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存

  顯色劑B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存

  終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存

  濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存

  需要而未提供的試劑和器材

  37℃恒溫箱。

  標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。

  移液器及一次性吸頭

  蒸餾水，

  一次性試管

  吸水紙

  注意事項(xiàng)

  從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

  各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差

  嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

  為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。

  不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

  底物B對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。

  洗板方法

  手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。

  自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中

  標(biāo)本要求

  1.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

  2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  操作程序

  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：(本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。)800 ng/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  400 ng/L4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品120μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  200 ng/L3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品120μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  100 ng/L2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品120μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  50 ng/L1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品120μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  根據(jù)代測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

  加樣：1)空白孔，空白對照孔不加樣品，生物素標(biāo)記的抗PDE抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同;2)標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul，鏈霉親和素-HRP50ul(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體，故不加);3)代測樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗PDE抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育60分鐘。

  配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

  顯色：每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

  終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

  測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

  根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。

  操作程序總結(jié)：

  試劑盒性能：

  1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。

  2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和15%

  檢測范圍：

  檢測范圍：25 ng/L -850 ng/L

  保存條件及有效期：

  保存：2-8℃。

  有效期：6個(gè)月(2-8℃)。

  上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。古朵試劑盒