技術分享：ELISA試劑盒常見類型競爭法
ELISA試劑盒常見類型競爭法
競爭法ELISA試劑盒也稱抑制或封閉法ELISA通過定量某種樣品分析物對預計信號的干擾，來測定該分析物在樣品中的含量，可通過以下方式進行：微孔板用一種分析物或一種對靶標分析物具有特異性的抗體包被(即直接法和間接法)，再添加一種有部分某種檢測的靶標分析物，以競爭結合抗體上的位點。信號與分析物含量呈負相關，因此，如果靶標分析物的濃度較分析物高，靶標分析物競爭性結合有限量的標記抗體，參考信號將會較靶標分析物的濃度較低的情況增強。競爭法的理論基礎是限量抗體，只有在限量抗體基礎上，兩種抗原才會形成競爭關系。該方法一般用來檢測具有較少表位的小分子物質。
實驗概要
以直接競爭法ELISA試劑盒為例，將特異性抗體吸附于固相載體，加入待測抗原(標準品或樣本)和.生物素標記的檢測抗原，二者競爭與固相抗體結合，然后加入辣根過氧化物酶標記的親和素，經過溫育和洗滌后加入顯色底物。顯色的深淺與樣品中待測物質含量呈負相關。準備所有的試劑和梯度稀釋的標準品。板條加入洗液靜置浸泡30 秒。標準品孔加入2倍倍比稀釋的標準品;非特異性結合(NSB)和大結合(B0)孔加入標準品稀釋液或培養基。
血清/血漿：
樣本孔加入樣本;細胞培養上清：樣本孔加入細胞培養上清。除了Blank和非特異性結合(TA)孔空白，NSB孔加入1×檢測緩沖液，其余每孔加入稀釋的偶聯物。封膜，室溫孵育1小時，洗滌6次。除了TA和Blank孔，其余每孔加入稀釋的HRP標記的鏈霉親和素。封膜，室溫孵育30分鐘，洗滌6次。TA孔加入稀釋的HRP標記的鏈霉親和素。每孔加入顯色底物，避光，室溫孵育5 - 30分鐘。每孔加入終止液。30分鐘內，在450nm波長檢測OD值，參考波長570nm或630nm。
注：以上步驟是以生物ELISA試劑盒為參考，不同廠家的ELISA試劑盒操作步驟可能不一樣，開始實驗前一定要仔細閱讀產品說明書
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