細胞知識點：細胞培養(yǎng)過程中常見的問題說明
細胞知識點：細胞培養(yǎng)過程中常見的問題說明
通過多次與客戶的了解和反饋，的售后服務(wù)人員發(fā)現(xiàn)，客戶在收到經(jīng)過專業(yè)包裝的細胞后，由于沒有經(jīng)過系統(tǒng)專業(yè)的檢查和處理，就直接進行實驗，以致于后期容易產(chǎn)生了一系列問題。鑒于客戶對這一方面的知識有所欠缺薄弱，技術(shù)人員經(jīng)過總結(jié)，對于在收到細胞怎樣專業(yè)處理做了以下說明：
一、問：細胞收到之后怎么處理?
答：常溫運輸?shù)募毎?
首先觀察包裝是否完好，瓶口是否漏液，然后顯微鏡先拍攝4x 、10x、 40x不同倍數(shù)下的照片各兩張。放入培養(yǎng)箱穩(wěn)定兩小時后開始換液，貼壁細胞把培養(yǎng)基全部吸去，加入6ml新的完全培養(yǎng)基，懸浮細胞離心后，用6ml完全培養(yǎng)基重懸細胞。注意細胞的培養(yǎng)環(huán)境。
低溫運輸?shù)募毎ǔＪ怯酶杀乃汀?
客戶收到細胞后，觀察干冰是否揮發(fā)，細胞是否溶解。沒有問題可以直接放入液氮罐保存(長時間)，或者溫冰箱(不超過一周)。
二、問：細胞凍存后，復(fù)蘇效果不好?
答：目前還有很多人采取4°、﹣20°各半小時再轉(zhuǎn)入-80°冰箱，這方法不好控制，有的細胞適合，有的細胞就達不到理想效果。現(xiàn)可采用程序降溫盒來凍存，降溫盒內(nèi)添加的異丙醇可以達到每分鐘降一度的要求，操作也簡單。
凍存液采用90%血清+10%DMSO。部分低分化或干細胞可以添加馬血清凍存，另外可以先將凍存液配置成80%血清+20%DMSO,重懸細胞時用血清重懸，避免直接用DMSO對細胞吹打造成損傷。
三、問：細胞有黑點怎么回事?
答：這種情況可能性就比較多了，首先判斷黑點是在細胞表面，還是胞質(zhì)內(nèi)，還是在細胞外。細胞表面黑點增多可能是因為狀態(tài)變差，可能是培養(yǎng)條件不適合導(dǎo)致，或者細胞活性降低。細胞質(zhì)內(nèi)黑點增多，先確認是否是多核細胞。細胞外有黑點，黑點游動則可能是細菌污染，不游動但隨著培養(yǎng)時間增長黑點數(shù)量增多，應(yīng)該檢測是不是支原體污染，懸浮細胞多數(shù)有黑點，可能是碎片，可低速離心去除。腺癌多數(shù)是分泌因子，看著黑點增多。
四、培養(yǎng)基，血清怎么選?
答：好和細胞來源用的什么品牌使用相同的血清。基礎(chǔ)培養(yǎng)基進口和國產(chǎn)差別不大。專業(yè)的細胞公司使用的血清都是經(jīng)過了大量細胞培養(yǎng)驗證的，不要輕易換，目前國內(nèi)血清品牌較多，質(zhì)量不齊。
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