古朵生物：抗體和重組蛋白的使用及保存方法

  無論是保存還是運輸，請避免反復凍融。反復凍融，冰晶會破壞抗體和重組蛋白的空間結(jié)構(gòu)，導致蛋白變性形成多聚體和重組蛋白構(gòu)象改變，從而降低抗體的結(jié)合能力，也加快了抗體球蛋白和重組蛋白的降解速度。抗體和重組蛋白保存得當與否，直接決定了抗體和重組蛋白的活性使用效果，如果保存得當，抗體和重組蛋白活性大部分都可以維持數(shù)年。

  1. 收到抗體和重組蛋白后的操作

  收到抗體和重組蛋白后(大部分抗體和重組蛋白是溶液態(tài))，請務(wù)必在 4℃，12000rpm，離心 3 分鐘，再打開管蓋進行分裝、溶解和保存(如果抗體和重組蛋白體積小于 50?l，請延長離心時間至 5 分鐘，以保證全部抗體和重組蛋白均離心下來，干粉狀態(tài)的同樣適用)。抗體和重組蛋白使用特制的儲存管，只有在 12000rpm 離心 3 分鐘，才能將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體和重組蛋白全部離心下來(即使是在 10000rpm 離心也會離心不*，導致出現(xiàn)抗體和重組蛋白的量不足的現(xiàn)象)。請詳細閱讀說明書，并按照推薦的保存條件正確保存和使用抗體和重組蛋白。

  2. 抗體和重組蛋白的長期保存

  對于 大部分抗體和重組蛋白，比較合適的保存方式是：抗體分裝后保存在 -20℃，重組蛋白分裝后保存在 -80℃。

  (1)分裝可以-大程度的降低反復凍融對抗體和重組蛋白活性的損害，同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體和重組蛋白造成的污染可能性。

  (2)分裝的量以一次實驗用完為好，少不能少于 10 ?l 每份。因為分裝體積越小，抗體和重組蛋白的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。

  (3)復融后的分裝抗體和重組蛋白如果一次用不完，將剩余母液保存在 4℃，避免再凍起來。

  (4)抗體和重組蛋白工作液應(yīng)該當天配制當天用完，4℃ 保存盡量不要超過 1 天。

  (5)絕-對避免將抗體和重組蛋白保存在自動除霜冰箱中，將抗體和重組蛋白保存在冰箱里層，避免溫度變化造成反復凍融。

  3. 抗體和重組蛋白的短期保存

  大部分 的抗體和重組蛋白收到后 4℃ 短暫保存 1~2 周，對抗體和重組蛋白活性沒有影響。如果抗體和重組蛋白很快會使用(1~2 周內(nèi))，推薦在 4℃ 保存，這是為了避免反復凍融對抗體和重組蛋白活性的損害。關(guān)鍵的一點是要根據(jù)說明書推薦的方式來正確的保存抗體和重組蛋白。

  4. 抗體和重組蛋白的運輸條件

  一般的運輸過程需要 1~2 周的時間，所以是在低溫 4℃ 的條件下來完成的。4℃ 運輸主要的目的是為了避免反復凍融對抗體和重組蛋白活性的損害(如果使用干冰運輸，那么收到時抗體和重組蛋白是凍起來的，為了分裝就需要解凍，這就多了一次凍融的過程)，所以運輸過程中一般避免干冰運輸。

  5. 抗體和重組蛋白的穩(wěn)定性

  (1)抗體的穩(wěn)定性是自然界長期進化的結(jié)果，抗體是免疫系統(tǒng)中重要的分子之一，其穩(wěn)定性是自然進化篩選的結(jié)果，在眾多物種中，抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。

  (2)抗體的高Tm值，在室溫下，甚至短時間溫度達到 50~60℃，抗體分子都能維持正確折疊，保持其應(yīng)有的活性。

  (3)抗體和重組蛋白的純度。 采用的抗體和重組蛋白純化技術(shù)，確保抗體和重組蛋白產(chǎn)品的高純度，保障其抗體和重組蛋白產(chǎn)品的穩(wěn)定性。

  (4)抗體和重組蛋白的濃度。高濃度的抗體和重組蛋白產(chǎn)品可減少容器表面吸附造成的物質(zhì)損失，高濃度的抗體和重組蛋白穩(wěn)定性好。 大部分抗體和重組蛋白濃度為 1mg/ml，抗體和重組蛋白純度高，特異性好，效價高。

  6. 重組蛋白的特性

  重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式，原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀態(tài)，真核細胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存，這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定，在 -80℃ 條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進行溶解，其中溶解的方法非常關(guān)鍵，因為溶解不好會降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細注意，這些都是用戶在實際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問題。

  (1)原核細胞表達的重組蛋白。 大腸桿菌表達的凍干重組蛋白，已經(jīng)從包涵體中提純，添加了蛋白保護劑，使用過濾后的無菌水作為復溶劑即可，復溶凍干蛋白 100?g，用 86?l 的超純水，輕輕搖晃使蛋白溶解，再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可*溶解，一定不能使用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃。

  (2)真核細胞表達的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯，還要進行翻譯后的加工，使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常，所以重組蛋白必須在真核細胞中進行，如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子，對翻譯后的蛋白質(zhì)進行加工，這樣表達的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來保存，保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。

  (3)重組蛋白的保護劑。在凍干和儲存過程中常用的保護劑或穩(wěn)定劑有糖類，多元醇，聚合物，表面活性劑，某些蛋白和氨基酸等。我們通常加 8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖和甘露醇作為凍干保護劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集，甘露醇也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護劑和填充劑。

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