ELISA檢測操作注意事項問題及解決方案
ELISA檢測操作注意事項問題及解決方案
以下是影響ELISA檢測的關鍵因素，也是眾多ELISA 用戶在實驗中經常遇到的問題及解決方案：
問題：為什么所有試劑和檢測樣本要平衡至室溫后再進行加樣操作?
解決方案：溫度是ELISA結合反應的重要影響因素。為了使所有樣本在一致的溫度下反應，實驗前務必將所有試劑平衡至室溫，包括檢測樣本。避免因溫度的動力學反應差異而導致ELISA檢測結果的不準確。
問題：為什么標準曲線線性較差?
解決方案：按照推薦方式保存標準品;溶解標準品之前需短暫離心，*收集粉末;確保標準品*溶解和混勻(大約10min)，然后再進行后續的系列稀釋步驟，確保每一步都充分混勻且移液;顯色的恰當終止;選擇合適的數學擬合方程繪制標準曲線。
問題：ELISA實驗為什么必須設置復孔?
解決方案：為獲得準確的實驗結果，強烈建議標準品及樣本進行復孔檢測。
因為復孔檢測可以：
計算平均值，確保實驗結果準確;
解決實驗中誤操作造成的跳孔現象;
計算CV值，對實驗的操作和試劑盒的度進行評估。
問題：為什么實驗過程中孵育、洗滌需要振蕩?如何振蕩?
解決方案：振蕩孵育使反應充分，振蕩洗滌使背景干凈。建議使用酶標96孔微孔板振蕩器。
孵育過程振蕩，可以加快、加強抗原抗體間的相互碰撞接觸，使得反應過程加*，OD值通常會比未振蕩孵育的結果要高;洗滌過程振蕩，可以使洗板干凈，在很大程度上能降低背景值，同時可以提高試劑盒檢測的靈敏度。
具體操作請參見說明書或致電研域生物。
問題：何時終止ELISA反應?
解決方案：ELISA實驗zui終需要酶催化底物顯色反應來完成，在zuijia時間終止反應是ELISA實驗成功的重要因素。在HRP-TMB酶反應系統中，當zui高濃度標準品顏色不再變深，倒數2-3個濃度標準品顏色開始有淺藍色時，便需要終止反應;或者也可以根據zui高濃度標準品孔在620nm的OD值來決定，OD620=0.9-0.95之間時即可終止。
問題：為什么酶標儀讀數時必須選用雙波長?
解決方案：首先，酶標儀使用前務必預熱10-15min，使測讀結果穩定。其次，ELISA實驗采用雙波長測定吸光度，可以排除單波長檢測時的測定干擾(標本的濃度，干擾色等)。一般采用zui大波長作為參照波長，在參照波長下，檢測物的吸光值zui小，檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收;因此，雙波長測定，可zui大限度的消除指紋、雜質及不透光的物質對酶標儀讀數帶來的誤差，以保證實驗數據的準確度
ELISA檢測操作注意事項問題及解決方案上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求”的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量”的方針。
