牛血清白蛋白的提取方法及用途?
牛血清白蛋白的提取方法及用途?
CAS：9048-46-8，又稱第五組分，牛血清白蛋白(BSA)，是一種常用的PCR擴增增強劑和穩(wěn)定劑，能夠起到穩(wěn)定擴增酶、降低PCR抑制物的作用，常見于核酸檢測試劑中，廣泛應(yīng)用于生物學(xué)諸多學(xué)科及醫(yī)、藥學(xué)各領(lǐng)域。
牛血清白蛋白(BSA)在動物細胞無血清培養(yǎng)中，起到生理和機械保護作用和載體作用。牛血清白蛋白(BSA)在生化實驗中有廣泛的應(yīng)用，例如在western blot和制備ELISA板中的封閉試劑。牛血清白蛋白(BSA)在生化研究、遺傳工程和醫(yī)藥研究，一般作為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中，也可用作醫(yī)藥保健食品、調(diào)味品。
牛血清中白蛋白(BSA)的制備方法很多，包括鹽析法、有機溶劑沉淀法和熱激法提取等，但目前的制備方法所得的牛血清白蛋白(BSA)收率或純度都比較低，存在脂肪酸、蛋白酶、核酸酶以及內(nèi)毒素等雜質(zhì)，限制了牛血清白蛋白(BSA)的進一步應(yīng)用，因此，一種高純度從牛血清中分離白蛋白的方法十分關(guān)鍵。
CN105017412B公開的制備牛血清白蛋白(BSA)的方法，克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，能夠從牛血中提取出高純度、高收率的牛血清白蛋白(BSA)，且不含小分子物質(zhì)以及只含較低濃度的內(nèi)毒素。包括以下步驟：
首先向牛血清中加入生理鹽水或PBS溶液將牛血清稀釋;再向稀釋后的牛血清中加入適量硫酸銨，2~8℃靜置30min以上，離心收集上清液;
第二步，向上清液中加入2~3倍體積的PBS溶液，混勻后進行疏水層析，使用PBS溶液洗脫，收集洗脫液;
第三步，將洗脫液進行分子篩層析，收集不含鹽和其它小分子的蛋白峰;所述層析填料為G10-G75葡聚糖;
第四步，使用陰離子交換層析進一步純化牛血清白蛋白(BSA)，通過0.1~1.5M濃度氯化鈉進行梯度洗脫，收集精純的牛血清白蛋白(BSA);
后，經(jīng)過對病原微生物進行滅活、分子篩層析、超濾濃縮、過濾除菌得到純度高于99.5%的牛血清白蛋白(BSA)。
這種方法大程度地去除血漿中的雜質(zhì)，有效提高了牛血清白蛋白(BSA)的純度，對于其在生化研究、遺傳工程和醫(yī)藥研究的應(yīng)用具有重要價值。
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