古朵生物|培養(yǎng)基中的添加物、PH值、保存的問(wèn)題
培養(yǎng)基中的添加物、PH值、保存的問(wèn)題
—細(xì)胞培養(yǎng)用液：除培養(yǎng)基、血清、谷氨酰胺外，其他幾種液體也屬必須，不可省略：
(1)雙抗：200倍，(1ml/支)其終濃度為青霉素100U/ml;鏈霉素100ug/ml，-24 oC保存。
(2)L-谷氨酰胺：100倍，(1ml/支)， 終濃度2mM，-24 oC保存。
(3)丙酮酸鈉：配制濃度50mM，4ml/支，終濃度為1mM/ml， -24 oC保存。
(4)Hepes液：配制濃度1M(5ml/支)，一支Hepes加入到200ml 完全培養(yǎng)基中，終濃度為25mM/ml，常溫保存。
—液體培養(yǎng)基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。
幾乎所有的細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺有較高的要求，細(xì)胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì)，在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡。所以，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置-20 ?C冰凍保存，用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4 度 冰箱儲(chǔ)存兩周以上時(shí)，應(yīng)重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺。
—培養(yǎng)用液pH對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
由于，大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2~7.4，偏離此范圍對(duì)細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細(xì)胞對(duì)pH的要求也不完全相同，原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對(duì)pH變動(dòng)耐受差，無(wú)限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。
但總體來(lái)說(shuō)，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些，偏酸環(huán)境中g(shù)eng利于細(xì)胞生長(zhǎng)。因此，我們?cè)谂渲婆囵B(yǎng)用液時(shí)，可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些。液體在經(jīng)過(guò)0.10um或0.22um濾膜過(guò)濾時(shí)，溶液的PH還會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右。
—液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好?還是冷凍好?
要冷藏!因?yàn)橐后w培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時(shí)，其溶液的PH值會(huì)發(fā)生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會(huì)受到影響對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不利。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個(gè)月 ~ 一年
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