ELISA實驗的基質(zhì)效應及常見問題解析
ELISA實驗的基質(zhì)效應及常見問題解析
在ELISA實驗中，偶爾會遇到樣品濃度挨近試劑盒的靈敏度就容易發(fā)生樣本OD450值低于空白值的現(xiàn)象，特別是在血清和血漿樣本中。這就有可能是基質(zhì)效應導致的結(jié)果。
那什么是基質(zhì)效應呢?
基質(zhì)效應：
分析中，基質(zhì)指的是樣本中被分析物以外的組分，基質(zhì)常常對分析物的分析進程有顯著的煩擾，并影響分析成果的準確性，這些影響和煩擾被稱為基質(zhì)效應。
仿照物與被測樣本在蛋白豐度、復雜性、pH等要素都會存在差異。當單個樣本或少量樣本值低于空白值時，可能是過錯要素，這時應增加重復，進步操作技術(shù)。當許多樣本都低于空白值時，應思考基質(zhì)效應的影響，建立校正曲線予以修改。
ELISA試劑盒在開發(fā)進程中，標準品不能選用人或動物血清、血漿作為標準曲線的稀釋液，只能選用其仿照物。當樣本的基質(zhì)與其仿照物對比，下降抗原抗體的聯(lián)絡，便產(chǎn)生了樣本值低于空白值的現(xiàn)象。構(gòu)成樣本值無法計算出數(shù)值，或許數(shù)值為負。
如今常用的去掉基質(zhì)效應的方法是，經(jīng)過已知分析物濃度的標準樣品，一同盡可能堅持樣本中的基質(zhì)不變，建立一個校正曲線。
講到了這里，那我們要如何去判斷是否是基質(zhì)效應呢?
當單個樣本或少量樣本值低于空白值時，可能是實驗操作出現(xiàn)問題，這時應增加重復，進步操作技術(shù)。當許多樣本都低于空白值時，應思考基質(zhì)效應的影響，建立校正曲線予以修改。基質(zhì)效應的原因錯綜復雜，有可能是樣品中存在的基質(zhì)導致原抗體的聯(lián)絡結(jié)合能力下降，便產(chǎn)生了樣本值低于空白值的現(xiàn)象。導致樣本值無法計算出數(shù)值，或許數(shù)值為負。雖然原因復雜，但有方法可以用來評估基質(zhì)效應。
01種：線性稀釋
一般來講，抗原和捕獲抗體、檢測抗體之間的結(jié)合作用很強，樣品濃度被稀釋并不影響它們的結(jié)合，而造成基質(zhì)效應的非特異結(jié)合的力要弱很多，如果不斷稀釋樣品，非特異結(jié)合造成的干擾會逐步減少，測量值也接近真實值。沒有基質(zhì)效應時，無論如何稀釋，測量值都和真實值吻合。而有基質(zhì)效應時，稀釋會造成非特異性結(jié)合比例的減少，測量值也相應地產(chǎn)生很大改變。
02 第2種：摻入回收率實驗
將低、中和高濃度的分析物摻入到已測定過濃度的樣本中，摻入前后實測到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈現(xiàn)。回收率介于80-120%，才符合標準。
如何避免基質(zhì)效應：
基質(zhì)效應可以通過產(chǎn)品研發(fā)階段的優(yōu)化盡可能去消除的。澤葉生物針對ELISA產(chǎn)品研發(fā)進行了多種優(yōu)化。ELISA試劑盒在開發(fā)進程中，標準品不選用人或動物血清、血漿作為標準曲線的稀釋液，只能選用其仿照物。我們量身定制的緩沖液系統(tǒng)，這些優(yōu)化后的緩沖液體系能很好消除基質(zhì)效應。還有當檢測某個分析物時，其他相關(guān)因子或類似結(jié)構(gòu)因子如果有非特異性結(jié)合，也會導致基質(zhì)效應，我們也因此做了大量的交叉反應，確保沒有明顯的交叉反應和干擾。而且我們試劑盒必須通過嚴格的基質(zhì)效應測試，全部包括線性稀釋和摻入回收率實驗，并把測試結(jié)果記錄在說明書中。
ELISA試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務質(zhì)量"的方針。研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務質(zhì)量"的方針。
