古朵闡述：關于ELISA試劑盒樣本的大致處理辦法

  一、液體樣本

  ELISA試劑盒液體樣本處理準則：一切的液體樣本，用無菌管搜集，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，假如今后碰到其他的液體樣本，也按這個辦法，納入匯總表。

  1、血清：用無菌管搜集，室溫血液自然凝結10-20分鐘，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，細心搜集上清，保存過程中如出現沉積，應再次離心。

  2、血漿：應根據標本的要求選擇EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，細心搜集上清，保存過程中如有沉積構成，應該再次離心。

  3、尿液：用無菌管搜集，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清，保存過程中如有沉積構成，應再次離心。

  4、胸腹水：用無菌管搜集，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，細心搜集上清，保存過程中如有沉積構成，應再次離心。

  5、腦脊液：用無菌管搜集，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，細心搜集上清，保存過程中如有沉積構成，應再次離心。

  6、唾液：用無菌管搜集，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，細心搜集上清，保存過程中如有沉積構成，應再次離心。

  7、細胞培養上清：檢測排泄性的成份時，用無菌管搜集。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，細心搜集上清，保存過程中如有沉積構成，應再次離心。

  8、牛奶：用無菌管搜集，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，細心搜集上清，保存過程中如有沉積構成，應再次離心。

  9、蜂蜜：用無菌管搜集，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，細心搜集上清，保存過程中如有沉積構成，應再次離心。

  10、全血：用含有抗凝劑的無菌管搜集，當即輕輕搖擺，來回輕輕倒置數次，使血液和抗凝劑混勻，以防血液凝結。

  二、固體樣本

  ELISA試劑盒固體樣本處理準則：稱取1g的固體樣本，用9g的適宜緩沖液溶解，排泄蛋白可以直接離心取上清檢測，細胞內的蛋白，要先搜集細胞，再用適宜辦法破碎，離心取上清測驗。

  1、安排標本：切割標本后，稱取1g安排，參加9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手藝或勻漿器將標本勻漿充沛。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，細心搜集上清。分裝一份待檢測，其他冷凍備用，保存過程中如有沉積構成，應再次離心。關于植物安排，不好勻漿的話，就在液氮中充沛研磨;

  2、細胞內蛋白樣本

  許多待測蛋白不是排泄蛋白，而是存在于細胞內的蛋白，這個時候，要先搜集細胞，洗刷干凈，再破碎細胞，離心取上清。

  (1)培養的細胞

  A、動物細胞：用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液，使細胞濃度到達100萬/ml左右。經過重復凍融(假如重復凍融，破碎作用不好，就采用超聲波破碎)，以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，細心搜集上清，保存過程中如有沉積構成，應再次離心。

  B、植物細胞：用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液，使細胞濃度到達100萬/ml左右，置于冰盒上，用超聲破碎儀，設置破碎2s，冷卻30s的方法，充沛破碎細胞，以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，細心搜集上清，保存過程中如有沉積構成，應再次離心。

  (2)安排的細胞

  切割標本后，稱取1g安排，參加9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手藝或勻漿器將標本勻漿充沛。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，去除上清，再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗刷沉積的細胞三遍。再用上述的細胞破碎辦法破碎細胞。

  3、土壤：稱取1g土壤，參加9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手藝將標本充沛混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，細心搜集上清。分裝一份待檢測，其他冷凍備用，保存過程中如有沉積構成，應再次離心。假如是測排泄蛋白，直接取上清檢測，測驗細胞內蛋白，要破碎細胞。

  4、咽拭子：參加2g的pH7.2-7.4左右的PBS，溶解咽拭子頭部，搖勻，用鑷子取出咽拭子并擠干液體，2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，細心搜集上清。分裝一份待檢測，其他冷凍備用，保存過程中如有沉積構成，應再次離心。假如是測排泄蛋白，直接取上清檢測，測驗細胞內蛋白，要破碎細胞。

  5.植物標本中相關酶或蛋白的測定：(粗提取)

  1、新鮮植物安排請在液氮中充沛研磨;

  2、參加樣品體積9倍的提取液(pH?7.4?PBS緩沖液),3、?請于4度，8000rpm，離心30分鐘，取上清并暫時保存于4度待用。

  三、ELISA試劑盒樣本搜集注意事項

  1、不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

  2、標本收集后趕快進行實驗，若不能馬上進行實驗，可將標本放于-20℃保存，但應防止重復凍融。

  3、咱們羅列的是通用的樣本處理辦法，無法涵蓋各種樣本，關于一些特殊樣本，主張實驗人員多參閱已宣布的文獻，自行設計合理的樣本處理辦法。

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