古朵帶你了解：ELISA樣本測值低的原因
ELISA樣本測值低的原因
ELISA實驗中，實驗者經常會遇到樣本測值低的問題，樣本類型包括血清、 血漿、組織勻漿、細胞裂解液等。假設實驗操作完全正確，標準曲線良好，這種情況樣本測值低可從兩方面進行分析：一是樣本本身含量可被檢測，但由于實驗操作等原因導致樣本測值不在試劑盒檢測范圍內;二是分析物在樣品中本身濃度偏低。下面將從這兩個方面來進行分析導致樣本測值低的因素以及對應的解決方案。
1、樣本本身含量可以被檢測，有哪些原因導致測值低呢?
(1)試劑盒的保存
試劑盒要按照規定的方法保存，實驗者在購買試劑盒時請務必留心試劑盒不同組分的保存方法。
(2)樣本上樣前的準備
這個過程包括樣本的制備、保存以及是否有經歷過反復凍融。樣本的制備要根據樣本類型采用不同的方法，血清、血漿與細胞裂解液的制備方法均不同。保存，包括保存溫度以及保存時間。一般推薦樣本制備后進行分裝后儲存在-20度或-80度，儲存時間不宜過久，因為長時間的儲存有可能導致目標蛋白的降解，致使檢測結果不理想。后注意不要反復凍融，蛋白樣本反復凍融會導致降解發生。
(3)稀釋方案
樣本的稀釋對于實驗的成功至關重要，稀釋過度以及稀釋不足均有可能導致樣本的測值低。
稀釋過度：一般情況下客戶都會根據文獻測值，以及檢測范圍估計一個稀釋倍數，一般的試劑盒在出廠之前也會做大量檢測，對于常規樣本如血清血漿，會根據實驗室樣本測值情況推薦一個稀釋倍數。但實驗者如果直接按照估計或推測的稀釋倍數進行稀釋檢測后，發現樣本OD非常低。這是由于文獻作者用的樣本，廠家實驗用的樣本與實驗者的樣本會存在一定的差異，這些測值有一定的參考意義，但如果照搬，可能會導致實驗失敗。所以建議實驗 者在正式試驗前是先做預實驗確定樣本的有效性以及佳稀釋倍數。
稀釋倍數不夠：鉤狀效應，ELISA實驗中發生鉤狀效應主要是當抗原與抗體比例不合適而導致假陰性的現象，抗原過量稱為后帶效應。當樣本中目標物含量很高，而沒有進行正確的稀釋，就有可能會導致假陰性反應。解決方案依舊同稀釋過度的解決方案一樣，在正式實驗之前做預實驗。
2、分析物在樣品中本身濃度偏低
很多時候，客戶操作沒有問題，標準曲線良好，但檢測多次樣本依然不在檢測范圍。像細胞因子，如 IL-6 需在炎癥刺激情況才會大量產生，一般非炎癥樣本測值會非常低。針對這種測值比較低的情況，一般建議根據文獻選取適合的樣本類型，同時可以選用高靈敏度的試劑盒。
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