人瘢痕性天皰瘡抗體(CP)ELISA試劑盒使用說明，特異性:本ELISA檢測試劑盒可同時檢測天然或重組的，且與其他相關蛋白無交叉反應。

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中文名：人瘢痕性天皰瘡抗體(CP)ELISA試劑盒
英文縮寫：Human cicatricial Pemphigoid,CP ELISA Kit
供應商：上海古朵
規格：48t/96t
存儲條件: 頻繁使用時（2-8攝氏度），較長時間儲存時（-20攝氏度）
有效期：6個月
特異性:本ELISA檢測試劑盒可同時檢測天然或重組的，且與其他相關蛋白無交叉反應。
檢測種屬：人、大小鼠、兔、羊、猴、豬、豚鼠ELISA檢測試劑盒等種屬。
檢測目的:用于測定血清，血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本。
適用范圍：此試劑盒僅用于科研實驗，禁用于臨床


人瘢痕性天皰瘡抗體(CP)ELISA試劑盒使用說明 使用原理：
1，ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。
2，結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。
3，在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。
4，用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。
5，此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。
6，由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。




注意事項：
1,封閉中的蛋白會非特異性將ELISA板子中沒有結合包被物的位點封閉掉,這樣之后加入的抗原或者抗體就不會再和板子發生非特異性的結合.使ELISA的結果更加的準確品
2，固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。
3，包被抗體的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，蛋白質包被的適濃度需進行滴定然后觀察陽性標本的OD值。
4，酶標記抗體工作濃度的選擇：先用直接ELISA法進行初步效價的滴定，然后再固定其它條件，后在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。
5， ELISA試劑盒酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，如 TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。


人瘢痕性天皰瘡抗體(CP)ELISA試劑盒使用說明 操作步驟：
1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本：取足夠數量的酶標包被板，固定于框架上，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。
7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
8、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s），37℃避光顯色15min。
10、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應（顏色由藍色立轉黃色）。
11、測定：以空白孔調零，在終止后15分鐘內，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
12、計算：根據標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。