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中文名：Ⅲ型膠原(ColⅢ)ELISA 試劑盒
規(guī)格：48t/96t
保存：2~8℃
有效期：6個(gè)月
樣本：血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
特點(diǎn)：敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便。
用途：用于測(cè)定血清，血漿及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性。
種屬：人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。
運(yùn)輸方式：現(xiàn)貨供應(yīng)，一般為快遞運(yùn)輸，江浙滬隔天到，外地及偏遠(yuǎn)地方三至五天時(shí)間到貨。
檢測(cè)原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。


Ⅲ型膠原(ColⅢ)ELISA試劑盒 檢測(cè)試劑注意事項(xiàng)：
1.  此試劑為體外檢測(cè)試劑，效期內(nèi)使用，試劑應(yīng)視為傳染物，不同總批號(hào)的試劑不能混用。
2． 使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出。室溫放置至少30分鐘，
3． 濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶后，請(qǐng)于37℃孵育15分鐘。
4． 濃縮樣品稀釋液出現(xiàn)結(jié)晶后，請(qǐng)于37℃孵育15分鐘
5． 若24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，標(biāo)本可存放于2～8℃。不需及時(shí)實(shí)驗(yàn)，標(biāo)本-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
6． 在反復(fù)清洗微孔板，并扣干微孔中的殘余液體，否則將降低精que度，造成吸光度偏離的假像。
7． 加樣完畢后，應(yīng)注意輕微搖動(dòng)微孔反應(yīng)條，以便使孔中的液體充分混勻。
8． 試劑盒保存于2～8℃，請(qǐng)勿冷凍，有效期請(qǐng)見盒內(nèi)標(biāo)示。



Ⅲ型膠原(ColⅢ)ELISA試劑盒 操作步驟：
1. 取出試劑盒，于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在室溫(20-25℃)內(nèi)進(jìn)行。
2. 取出酶標(biāo)板，按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入50μl的樣品，空白對(duì)照加入50μl的蒸餾水；
4. 在樣品孔中加入10μl的生物素；(不含空白對(duì)照孔,切忌：生物素只加樣品孔！)
5. 在各孔中加入100μl的酶標(biāo)記溶液；(不含空白對(duì)照孔)
6. 將酶標(biāo)板用封口膠密封后，37℃孵育反應(yīng) 1小時(shí)；(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)
7. 充分清洗酶標(biāo)板3-5次，保持各孔有充足的水壓；(濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋)
8. 酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙徹底拍干；
9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl；(不含空白對(duì)照孔)
10. 20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘；
11.各孔加入50μl終止液，終止反應(yīng)；





操作流程：
（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。


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